目的 研究唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞体外增殖和成骨分化的影响。方法 将小鼠胚胎成骨细胞体外传代培养，使用含不同浓度（1.0、0.1 μmol/L）唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞，不含唑来膦酸的培养基作对照，培养1、3、5 d采用CCK-8试剂盒检测唑来膦酸对成骨细胞增殖的影响；培养14 d行碱性磷酸酶（ALP）染色；培养21 d行茜素红染色；培养7 d，实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测转录因子Runx2、成骨标志物Ⅰ型胶原（Collagen Type Ⅰ）、ALP、骨钙素（OCN）基因的表达，免疫印迹法（Western Blotting）检测转录因子Runx2蛋白的表达。结果 不同浓度的唑来膦酸干预细胞后，CCK-8实验检测吸光度值随天数增加而升高，各组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。随着唑来膦酸浓度的升高，ALP染色和茜素红染色逐渐变浅，Runx2、Collagen Type Ⅰ、ALP、OCN基因的表达量降低，Runx2蛋白的表达量降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论唑来膦酸在选定浓度（1.0、0.1 μmol/L）下不影响成骨细胞的增殖，但对其分化功能的抑制作用随着浓度的增加而增强。]]> 2014/8/1 16:59:28 84true 目的 观察慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases, COPD）患者骨密度（BMD）的变化与血清炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6（IL-6）的关系。方法 选取稳定期COPD患者72例（COPD组），另选匹配正常对照组60例，所有对象均测定腰椎(L_2～4)的BMD、肺功能，并测定所有入选对象的血钙、血磷、血清碱性磷酸酶(ALP)、TNF-α、IL-6、骨钙素及尿吡啶啉/肌酐。结果 COPD组与对照组比较血钙、血磷、ALP差异均无统计学意义(P＞0.05)；COPD组BMD及骨钙素较对照组低，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，且COPD组血清TNF-α、IL-6及尿吡啶啉/肌酐较对照组高，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。COPD患者的血清TNF-α、IL-6水平分别与BMD及骨钙素均呈负相关(均P＜0.05)，与尿吡啶啉/肌酐呈正相关(r=0.457，P＜0.05)，而与血钙、血磷、ALP无相关性(P＞0.05)。结论 COPD患者骨吸收增加、BMD减低与炎症因子TNF-α、IL-6的增高相关，COPD的全身炎症反应可能促进骨质疏松的发生。]]> 2014/8/1 16:59:28 83true 目的 观察雷尼酸锶(strontium ranelate，SR)对磨损颗粒诱导炎性骨溶解的影响。方法 30只雄性C57BL/J6小鼠，随机分为空白组、对照组和药物组，每组10只。采用钛（Ti）颗粒诱导的小鼠颅骨溶解模型，药物组建模当日经灌胃予SR［600 mg/(kg·d)］，空白组和对照组不予处理；持续至建模后10 d，处死取材。HE染色观察颅骨溶解程度及骨膜厚度；抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色检测成熟破骨细胞；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6表达水平。 结果 HE染色结果，对照组骨膜明显增厚，颅骨溶解区域广；图像分析软件测量结果，对照组骨膜厚度（0.27±0.04） mm，骨溶解率为0.47±0.11，与药物组［（0.11±0.02） mm，0.18±0.05］比较，差异有统计学意义（P<0.05）；TRAP染色结果，对照组颅骨大片紫红色区域，SR治疗后明显减少；ELISA检测结果，SR加入后，TNF-α 、IL-1β和IL-6的表达量分别为［（145.6±14.2） ng/L、（130.2±8.2） ng/L和（137.6±8.2） μg/L］，与对照组［（210.2±8.9） ng/L、（159.6±9.7） ng/L、（170.8±9.5） μg/L］比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 SR能够减轻Ti颗粒引起的炎症反应、减少炎症因子分泌，抑制骨溶解。]]> 2014/7/2 16:31:59 82true 目的 鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞，检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法 用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs，在荧光显微镜下观察绿色荧光，并且以流式细胞术检测转染效率，最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致；流式细胞术检测转染效率达到52.76%；Western Blot检测在炎症环境刺激下，转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论 成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达，为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。]]> 2014/7/2 16:31:59 81true 目的 研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）以及骨形态发生蛋白2（bone morphogendtic protein 2，BMP-2）对成骨细胞增殖的调节作用。方法 提取人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）并使其分化为成骨细胞，分别添加不同浓度的VEGF和BMP-2进行药物干预，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法研究成骨细胞的增殖率。结果 两组干预组的吸光度（A）值与对照组的A值相比较，差异有统计学意义（P<0.05），对成骨细胞增殖的调节作用均随剂量和时间变化而改变，两组调节作用的最佳时间均为72 h左右。两组最佳作用浓度分别为：BMP-2为1.8×10^-9mol/L，对成骨细胞的增殖率达179.59%；VEGF为1×10^-8mol/L，其增殖率达189.80%。结论 VEGF对成骨细胞增殖的促进作用不亚于BMP-2。]]> 2014/7/2 16:31:59 80true 目的 通过对3D打印钛孔结构与实体钛结构椎体植入猪腰椎后进行体外生物力学测试，评价其活动范围情况及即刻生物力学稳定性。方法 选取18具新鲜成年猪脊柱标本（L₁~L₆）随机分配到以下三组：对照组（未置换）、钛孔结构椎体置换组（取出L₃椎体行钛孔结构椎体植入，简称钛孔结构组）、实体钛结构椎体置换组（取出L₃椎体行实体钛结构椎体植入，简称实体钛组）。测试标本的前屈、后伸、侧屈、轴向旋转角位移运动变化。结果 实体钛组、钛孔结构组分别与对照组在各方位角位移运动范围比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）；钛孔结构组与实体钛组在各方位的角位移运动范围比较，差异均无统计学意义（均P>0.05），且两种固定状态下各方位的即刻稳定指数比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 两种3D打印人工椎体方法均能获得良好的即刻稳定性，但3D打印的钛孔结构人工椎体在融合方面优于实体钛结构。]]> 2015/11/25 10:42:40 79true 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）配体罗格列酮（rosiglitazone，RGZ）对前列腺癌PC-3细胞血管生成拟态的影响。方法 体外培养人前列腺癌PC-3细胞，应用细胞增殖与毒性检测（Cell Counting Kit-8，CCK-8）法观察罗格列酮不同浓度和不同作用时间对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响；体外建立matrigel三维培养系统，观察罗格列酮对PC-3细胞血管生成拟态（vasculogenic mimicry，VM） 形成的影响；应用RT-qPCR和ELISA的方法检测血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cadherin，VE-cadherin）、EphA2、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA和 VEGF蛋白的表达。结果 罗格列酮在48 h后明显抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。前列腺癌PC-3细胞在体外三维培养条件下能够形成环状和网络样结构。罗格列酮能够抑制PC-3细胞VEGF、VE-cadherin、EphA2 mRNA及VEGF蛋白的表达，并使其形成血管生成拟态的能力明显降低。结论 罗格列酮可能通过下调前列腺癌细胞VEGF、VE-cadherin、EphA2的表达抑制血管生成拟态形成。]]> 2015/11/25 10:42:41 78true 目的 探索具有最佳抗骨质疏松作用的他汀药物种类和药物剂量，为进一步研究他汀药物同时发挥抗骨质疏松和调脂作用提供基础。方法 40只12月龄新西兰白兔通过双侧卵巢切除和泼尼松龙诱导8周建立骨质疏松症模型，随机分为四组：生理盐水（normal saline, NS）组，瑞舒伐他汀（rosuvastatin, RSV）组，辛伐他汀（simvastatin, Sim）组，阿仑膦酸钠片（Alendronate, ALN）组。RSV组和Sim组按药物浓度梯度分为五个小组。定期测量白兔股骨骨密度（bone mineral desity, BMD）和骨钙素（bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins, BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（tartrate-resistant acid phosphatase 5b, TRACP-5b）值。结果 8周末BMD较0周时明显降低（P＜0.05）。12、24和36周末，RSV组、Sim组和ALN组比NS组BMD、BGP水平明显升高，TRACP-5b水平显著降低（P＜0.01），并且RSV组与ALN组指标接近（P＞0.05）。RSV组内中以60 mg/（kg·d）喂养时，BMD、BGP较其他组明显升高。结论 他汀类药物具有抗骨质疏松的作用，效果接近唑来膦酸；亲水性瑞舒伐他汀比疏水性他汀药物作用更佳；并且剂量在60 mg/（kg·d）时效果更好。]]> 2015/11/25 10:21:44 77true 目的 探讨感觉神经肽P物质（substance P, SP）对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖的影响并初步揭示其中可能的机制。方法 体外培养SD（Sprague-Dawley）大鼠BMSCs。细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性；在10^-8 mol/L的SP刺激下，采用实时荧光定量PCR（real-time qPCR，RT-qPCR）检测第1、3、5和7 天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因（β-catenin、c-myc、cyclin D）的表达情况。SP组单纯添加10-8 mol/L的SP，SP+LiCl（糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl）组在SP组基础上添加6×10^-3 mol/L的LiCl，SP+Dkk-1 (Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10^-9 mol/L的Dkk-1，以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate，PBS)为空白对照组。结果 CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖，以10^-8 mol/L的SP作用最为显著。RT-qPCR结果显示SP刺激下，β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异，10^-8 mol/L的浓度差异最为显著，并且呈明显的时间依赖，第5天mRNA表达出现顶峰。并且SP+LiCl组β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强，而SP+Dkk-1组明显抑制。结论 SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖。]]> 2015/11/25 10:21:44 76true 目的 研究人肌腱成纤维细胞（tendon derived fibroblasts, TDFs）在聚乳酸（poly-L-lactic acid, PLLA）纳米纤维支架及聚乳酸/Ⅰ型胶原蛋白（PLLA/Col-Ⅰ）纳米纤维支架上的生长情况及相关基因的表达情况。 方法 将TDFs分别种植于空白盖玻片（空白组）、载有PLLA纳米纤维支架的盖玻片（PLLA组）和载有PLLA/Col-Ⅰ纳米纤维支架的盖玻片上（PLLA/Col-Ⅰ组），观察细胞生长情况，并检测Ⅰ、Ⅲ、Ⅹ型胶原蛋白（Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Col-Ⅹ）以及整合素相关基因黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)的基因表达情况。 结果 PLLA组细胞生长速度低于空白组和PLLA/Col-Ⅰ组，而PLLA/Col-Ⅰ组和空白组相比，细胞生长速度差异无统计学意义。和PLLA组及空白组相比，PLLA/Col-Ⅰ组中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Col-Ⅹ以及FAK基因表达水平显著升高，PLLA组和空白组无明显区别。结论 PLLA/Col-Ⅰ纳米纤维支架对TDFs的生长有促进作用，且有利于Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Col-Ⅹ及FAK基因的表达，能为肌腱修复提供一种理想的组织工程支架材料。]]> 2015/2/5 14:48:11 75true 目的 探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid, LPA）调控脂肪干细胞（adipose-derived stem cells, ASCs）增殖的作用及其分子机制。方法 分离SD大鼠ASCs，利用LPA对其进行干预，干预时间为1 h，采用Western Blot检测YES相关蛋白（yes associated protein, YAP）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）蛋白表达水平。利用免疫荧光检测YAP亚细胞定位，逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）检测CTGF和Ankrd1的mRNA表达水平。慢病毒转染ASCs，Western Blot检测不同分组YAP蛋白表达。进一步利用流式细胞术和CCK-8法检测不同分组中ASCs增殖情况。最后采用RhoA抑制剂C3干预，免疫荧光检测不同分组中YAP亚细胞定位，Western Blot检测YAP、CTGF和GTP-RhoA的表达情况。结果 LPA能显著促进YAP的表达和在细胞核内的聚集，同时LPA也能够促进YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表达。LPA能上调YAP靶基因CTGF和锚蛋白重复域1（ankyrin repeating domain 1, Ankrd1）的mRNA表达水平。慢病毒转染敲除YAP表达后，LPA对YAP的上调作用被明显抑制。细胞周期流式细胞术和CCK-8检测结果显示LPA可显著促进ASCs的增殖，但在shYAP慢病毒转染特异性敲除YAP后，LPA对ASCs的促增殖能力被明显削弱。RhoA抑制剂C3处理后，LPA对YAP细胞核聚集的促进作用被削弱，同时LPA对YAP、CTGF和GTP-RhoA表达的促进作用也得到了明显抑制。结论 LPA能够通过RhoA-YAP通路调控ASCs的增殖。]]> 2016/12/8 16:26:06 74true 目的 初步探讨低磷食物对模拟失重下小鼠骨丢失防治的可能性及防治效果，为后期可能的临床应用提供实验依据。方法 利用尾部悬吊法模拟失重。将24只C57BL/6雌性小鼠随机分为四组，即对照（CON）组、对照低磷（CON-LP）组、悬尾（SUS）组及悬尾低磷（SUS-LP）组，每组6只。4周实验期满后取小鼠后肢骨标本，通过Micro-CT扫描分析比较各组小鼠股骨的骨体积分数（bone volume fraction, BV/TV）、骨小梁密度（trabecular density, Tb.Density）等骨密度参数，骨小梁厚度（trabecular thickness, Tb.Th）、平均骨小梁数（trabecular number, Tb.N）等骨形态学参数。通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP）染色、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色和丽春红三色（Ponceau S）染色对各组小鼠胫骨生长发育和改建情况进行组织形态学观察。结果 Micro-CT结果显示，CON-LP组与CON组比较：骨密度参数BV/TV和Tb.Density减小（P＜0.05），形态学参数Tb.Th增高和Tb.N减少（P＜0.05）。SUS-LP组与SUS组比较：骨密度参数BV/TV和Tb.Density减小（P＜0.05），形态学参数Tb.Th和Tb.N减少（P＜0.05）。染色结果显示：悬尾的小鼠（SUS组、SUS-LP组）与地面的小鼠（CON组、CON-LP组）比较，骨小梁出现明显的骨吸收，Tb.N减少、骨小梁间距变大。CON-LP组与CON组比较，Tb.Density减低、Tb.N减少。SUS-LP组与SUS组比较，骨小梁变细、Tb.N减少。结论 低磷食物对模拟失重下小鼠后肢骨骨丢失防治效果不明显，甚至可能产生不利的后果。]]> 2016/12/8 16:26:06 73true 目的 提高腺病毒（adenovirus, ADV）在缺乏柯萨奇腺病毒受体（coxsackie and adenovirus receptor, CAR）的骨肉瘤细胞中的转染效率。方法 通过昆虫（Bac-to-Bac）杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段（sCAR）及TMTP1肽的重组蛋白（sCAR-TMTP1），并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293（HEK293）的CAR表达水平，ADV对其的感染效率及FITC-TMTP1的结合能力。重组蛋白sCAR-TMTP1与ADV共同孵育形成复合物，流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞（MG-63）中的转染效率。结果 表达及纯化的sCAR-TMTP1蛋白在相对分子质量约31 000处可见特异蛋白条带，感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠sCAR单克隆抗体发生特异性反应。MG-63可与FITC-TMTP1特异结合，其CAR表达水平低，ADV转染效率低。经sCAR-TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG-63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV（ADV/GFP）。结论 重组蛋白sCAR-TMTP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。]]> 2016/12/8 16:26:06 72true 目的 探讨新型改良大鼠脊髓损伤模型椎管开窗方法的实用性。方法 将40只普通级成年SD（Sprague-Dawley）大鼠按照随机数字表法分为两组：传统组（20只，采用传统蚕食法椎管开窗进行造模）、改良组（20只，采用椎板揭盖开窗法进行造模），比较两组切口长度、手术时间、术中出血量及术后死亡率，并于术后不同时间点评价两组大鼠运动功能（basso beattie bresnahan, BBB）评分及HE染色结果判定脊髓功能障碍及造模成功与否。结果 切口长度、手术时间、出血量及术后28 d死亡率的比较，改良组明显优于传统组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。两组大鼠术后BBB评分及HE染色结果提示以椎板揭盖开窗法制备大鼠脊髓损伤模型成功率与传统方法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 改良大鼠脊髓损伤模型椎板开窗相较传统椎管开窗方法有明显的优势，可广泛运用于脊髓损伤基础研究的模型制作。]]> 2016/12/8 16:26:06 71true 目的 比较Kartogenin（KGN）与转化生长因子β3（TGF-β3）/骨形态发生蛋白2（BMP-2）/地塞米松（DEX）对兔滑膜间充质干细胞（synovial-derived mesenchymal stem cells, SMSCs）增殖及成软骨分化的作用。方法 于6~10月龄新西兰大白兔膝关节处滑膜中分离培养SMSCs，并进行鉴定。设置KGN组（采用KGN干预）、T/B/D组（TGF-β3/BMP-2/DEX联合干预）及空白对照组，采用PELLET系统培养法分别培养各组细胞。通过比较各组细胞的增殖速度、软骨微球的直径和重量、Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）表达情况、成软骨分化相关标志基因表达及蛋白质合成量等指标来评价KGN对SMSCs增殖及成软骨能力的影响。结果 成功从兔膝关节滑膜分离出SMSCs；KGN组的SMSCs增殖能力弱于T/B/D组，但KGN组软骨微球直径最大，重量最重，Ⅱ型胶原合成量最多，且均显著高于其他组；PCR及Western Blot结果表明KGN组成软骨分化相关基因的表达最强，蛋白质合成量最多。结论 KGN不能明显增强SMSCs的增殖能力，但对SMSCs的成软骨分化能力强于TGF-β3/BMP-2/DEX，将来可能应用于修复软骨损伤。]]> 2016/10/9 16:14:16 70true 目的 探讨Polo样激酶1（polo-like kinase 1, PLK1）的小分子抑制剂NMS-P937对骨肉瘤细胞增殖的影响及其作用机制，并分析PLK1蛋白水平与临床骨肉瘤患者预后的关系。方法 本研究采用HOS、Saos-2骨肉瘤细胞系以及人成骨细胞系HOB-C作为实验细胞，通过Western Blot和荧光定量PCR检测PLK1在不同细胞系中蛋白和mRNA的表达水平；分别用不同浓度（0.01、0.05、0.1、0.2、0.5 μmol/L）的NMS-P937干预骨肉瘤细胞，采用MTT比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测不同浓度NMS-P937对骨肉瘤细胞系细胞周期的调控作用；免疫共沉淀技术检测PLK1蛋白与p53蛋白的相互作用情况；通过对骨肉瘤患者的组织芯片分析及随访，分析PLK1蛋白表达水平与临床预后的关系。结果 研究结果表明与人成骨细胞系HOB-C细胞相比，HOS、Saos-2骨肉瘤细胞系中PLK1蛋白和mRNA表达水平更高；NMS-P937可有效抑制骨肉瘤细胞的增殖，且经过NMS-P937处理后，S、G2/M期的骨肉瘤细胞Saos-2显著升高，G0/G1期细胞显著降低；细胞免疫共沉淀结果表明PLK1与p53蛋白存在相互作用；生存分析显示PLK1的表达水平与患者生存率呈负相关。结论 PLK1抑制剂可抑制骨肉瘤细胞的增殖，这可能与PLK1通过调节p53蛋白参与细胞周期转换过程有关，此外，PLK1蛋白水平的高度表达与患者不良预后密切相关，提示PLK1蛋白可作为临床潜在治疗骨肉瘤患者的有效靶点。]]> 2016/10/9 16:14:16 69true 目的 通过研究基质细胞衍生因子-1（stromal derived factor-1, SDF-1）对小鼠关节软骨细胞自噬的影响，探讨SDF-1在骨性关节炎中的作用及机制。方法 分离并体外培养小鼠关节软骨细胞，分别予以0、1、10、100、1 000 μg/L浓度的五组重组SDF-1蛋白干预24 h。运用RT-PCR检测各组细胞的微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3）和UNC-51样激酶复合物1（uncoordinated-51 like kinase 1, ULK1）mRNA表达情况，运用Western Blot方法检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、ULK1及泛素连接蛋白62（ubiquitin-binding protein p62, p62）蛋白表达水平，通过透射电镜观察自噬溶酶体。结果 RT-PCR结果显示10、100、1 000 μg/L浓度条件下LC3、ULK1的mRNA水平明显高于对照组，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot结果显示1、10、100、1 000 μg/L的各组细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、ULK-1表达水平较对照组升高，p62蛋白表达水平较对照组明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜结果显示经SDF-1干预后，自噬溶酶体较对照组增多，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 SDF-1可诱导小鼠关节软骨细胞自噬的发生，SDF-1可能通过调节软骨细胞自噬水平参与了骨性关节炎的进展。]]> 2016/8/3 7:05:25 68true 目的 研究Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法 用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性，通过Real-time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达；通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平；并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后，再用氯化锂干预细胞，通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果 沉默YAP基因后，磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少，c-Myc和Nanog基因表达减少，Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高，并且软骨细胞分泌基质增多；沉默Lats1基因后，磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加，c-Myc和Nanog基因表达上调，Sox9、Col2和Aggrecan基因表达减少，并且软骨细胞分泌基质减少。此外，氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。]]> 2016/6/13 15:40:18 67true 目的 探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α）诱导分化的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）复合纳米羟基磷灰石（nano-hydroxyapatite, nano-HA）人工骨修复兔桡骨缺损的效果。方法 取兔胫骨的骨髓分离培养并鉴定BMSCs；制备携带HIF-1α的慢病毒表达系统，感染BMSCs后与nano-HA共培养得到HIF-1α-eGFP/BMSCs/nano-HA人工骨材料。将30只2月龄新西兰大白兔随机分为3组，每组10只，均通过手术截骨后制成桡骨骨缺损模型，实验组填充HIF-1α-eGFP/BMSCs/nano-HA人工骨材料，对照组填充BMSCs/nano-HA，空白组不填充任何材料。于术后4、8、12周摄X线片观察骨缺损处，并于术后12周获得兔桡骨的大体标本和病理切片，比较桡骨缺损的愈合情况。结果 经鉴定，分离培养得到的BMSCs形态良好，高表达CD90、CD105；所有实验动物的桡骨中段缺损模型均构建成功，通过对实验兔的大体标本、X线片及病理切片进行比较分析，实验组和对照组的骨缺损均有所修复，但实验组的新骨形成量更大，骨缺损修复能力优于对照组，空白组骨缺损区未能得到修复。结论 HIF-1α诱导分化的BMSCs与nano-HA复合制成的HIF-1α-eGFP/BMSCs/nano-HA复合人工骨具有良好的骨缺损修复能力，可能成为一种理想的骨缺损修复材料。]]> 2016/6/13 15:40:19 66true 目的 通过蛋白芯片筛选血清中反映早期绝经后骨质疏松症发生、发展的标志性分子。方法 3月龄雌性SD大鼠20只，随机分为卵巢切除（ovariectomized, OVX）组和假手术（sham operation, Sham）组，每组10只，分别进行卵巢去势手术和假手术处理。术后2、4、6、8周对两组大鼠进行活体显微CT扫描，测量股骨远端骨密度及相关松质骨形态计量学动态参数；同时经内眦静脉取血，利用蛋白芯片检测血清中不同蛋白因子的含量。结果 显微CT检测结果显示OVX组大鼠骨密度（BMD）、相对骨体积（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数目（Tb.N）从第4周开始下降，骨小梁分离度（Tb.Sp）开始上升，Sham组未见明显变化；到第8周各指标在OVX组与Sham组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。蛋白芯片检测结果显示OVX组中干扰素-γ（IFN-γ）、β神经生长因子（b-NGF）分别从术后4周和6周后开始升高，同Sham组比较均至第8周具有明显差异（P＜0.05）。结论 IFN-γ和b-NGF水平在绝经后骨质疏松早期开始增高，可考虑作为诊断早期绝经后骨质疏松症发生的新型蛋白分子。]]> 2016/4/12 10:03:36 65true 目的 观察硫化氢(H₂S)及其合成酶胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和3-巯基丙酮酸硫转移酶（MPST）在人成骨细胞株及人成骨肉瘤细胞系中的表达。方法 我科于2013年6月至2014年12月运用免疫组化染色和蛋白质印迹方法在人永久性成骨细胞株hFOB1.19，成骨肉瘤细胞株Saos-2、MG-63和U-2 OS中分别检测CBS、CSE和MPST基因表达量、蛋白含量；通过敏感硫电极法检测H2S在正常成骨组织和骨肉瘤细胞中的含量。分别比较H2S及其合成酶在各组之间的差异，初步探讨H2S及其合成酶与不同成骨肉瘤细胞之间的关系。结果 在成骨肉瘤标本和细胞中CBS、CSE和MPST基因的较高表达；成骨肉瘤组织与成骨细胞来源的正常和恶性肿瘤细胞CBS、CSE和MPST基因表达的蛋白水平以及H₂S产生率不同，其中成骨肉瘤细胞株U-2 OS表达水平最高。结论 内源性H2S及它的合成酶CBS、CSE和MPST存在于人恶性成骨肉瘤组织和细胞中，高水平的H2S及其生物合成物质或许能成为成骨肉瘤治疗的新靶点。]]> 2016/4/12 10:03:36 64true 目的 探讨不同浓度梯度地西他滨对破骨细胞形成、活性及吸收功能的影响。方法 不同浓度地西他滨（0、0.1、0.25和0.5 μmol/L）处理单核巨噬（RAW264.7）细胞。通过4’，6-联眯-2-苯基吲哚（4,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride, DAPI）染色和微丝绿色荧光探针（F-actin-Trakcer Green）染色后观察F-actin环的形成即破骨细胞轮廓；抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒检测细胞上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性，骨板吸收实验检测破骨细胞的骨吸收能力；Q-PCR实验检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP）、组织蛋白酶K（cathepsin K, CK）和脊髓基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9, MMP-9）的mRNA表达。结果 不同浓度地西他滨抑制核因子NF-κB配体激活因子（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）诱导RAW264.7细胞形成F-actin环，降低了破骨细胞的TRAP酶活性，抑制了破骨细胞的骨吸收能力，同时也下调了破骨细胞标志基因TRAP、CK和MMP-9的mRNA表达。且随着药物浓度的增高，上述的抑制作用越明显。结论 地西他滨抑制破骨细胞形成、活性和骨吸收能力，且这种抑制作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。]]> 2016/4/12 10:03:36 63true 目的 探索人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）的无饲养层培养方法，并对此方法培养的iPSCs进行鉴定。方法 将人iPSCs接种于玻璃粘连蛋白（Vitronectin XF）包被的培养皿上培养，采用EDTA消化传代。倒置显微镜下观察iPSCs的生长状态；碱性磷酸酶（ALP）染色鉴定；采用PCR和免疫荧光检测iPSCs多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2的表达情况。结果 倒置显微镜下可见 iPSCs呈典型的克隆状生长，克隆呈圆形或椭圆形，边界清晰、整齐；ALP染色结果阳性；PCR结果显示人iPSCs强表达多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2；免疫荧光结果显示多能干细胞特异性指标SSEA-1、Nanog、Sox2均呈阳性。结论 无饲养层培养体系培养人iPSCs，细胞能稳定增殖，保持自我更新潜能及多能性。]]> 2016/2/4 14:38:05 62true 目的 通过慢病毒干扰技术丝氨酸蛋白酶抑制剂B3（serine proteinase inhibitor B3, Serpin B3）在Walker256细胞株中的表达，建立乳腺癌骨转移瘤模型，探讨Serpin B3对大鼠乳腺癌Walker256细胞骨转移的影响。方法 构建靶向干扰Serpin B3（RNAi）慢病毒，感染乳腺癌Walker256细胞，以干扰Scramble序列作为对照，Real-time PCR和Western blot检测Serpin B3干扰效率。将32只SPF级雌性SD（sprague-dawley）大鼠随机均分为四组：阴性对照组、阳性对照组、骨癌痛阴性病毒对照组（LV-Scrl组）、骨癌痛干扰病毒组（LV-Serpin B3 shRNA组），各组于右腿胫骨平台分别注射20 μl灭菌PBS、Walker256细胞、转染Scrl的Walker256细胞、转染RNAi的Walker256细胞。模型构建成功后21 d，Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠转移瘤中Serpin B3 mRNA、蛋白表达含量；取各组大鼠患侧胫骨组织行甲苯胺蓝染色，观察肿瘤组织病理变化。结果 阳性对照组Serpin B3在乳腺癌细胞中高表达；与阳性对照组相比，LV-Serpin B3 shRNA在大鼠Walker 256细胞高效率表达，导致在骨转移瘤组织中Serpin B3 mRNA、蛋白表达明显降低（均P＜0.05），且患侧骨组织破坏程度减轻。结论 Serpin B3在乳腺癌转移瘤组织中高表达，干扰Serpin B3表达能减弱乳腺癌Walker256细胞的骨转移倾向。]]> 2017/12/18 16:50:31 61true 目的 研究低频电磁场对组织工程化骨成骨能力的影响及修复兔股骨中段节段性骨缺损的效果。方法 将兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）接种至β-磷酸三钙（beta-tricalcium phosphate, β-TCP）支架上构建组织工程化骨，并连续7 d给予低频电磁场暴磁处理，每天4 h。通过CCK-8法检测暴磁处理后BMSCs/β-TCP复合体内细胞的增殖情况，实时荧光定量PCR分析骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2, BMP2）、骨桥蛋白（osteopontin, OPN）和Runt相关基因2（runt-related transcription factor 2, RUNX2）mRNA的表达，定量检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）的活性；制作兔股骨中段节段性骨缺损模型，植入经过暴磁处理的BMSCs/β-TCP复合体，术后4、12周进行X线检查和组织学检测。结果 低频电磁场可以促进组织工程化骨中BMSCs的增殖，暴磁处理后成骨基因BMP2、RUNX2和OPN的表达量明显增加，ALP活性显著增高。动物体内实验结果显示暴磁组的Lane-Sandhu X线评分较对照组明显升高，组织学结果显示暴磁组新骨生成的速度和骨缺损修复效果优于对照组。结论 低频电磁场可提高组织工程化骨的成骨能力，暴磁干预后的组织工程化骨具有较好的骨修复效果。]]> 2017/10/13 20:28:58 60true 目的 从细胞水平证实尼古丁对大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）诱导分化为软骨细胞的干预作用。方法 大鼠BMSCs传代至第3代，以海藻酸钠微球生物支架进行BMSCs三维培养。加入转化生长因子β1（TGF-β1）进行诱导分化，在细胞分化过程中，分别给予0.1、1、10、100 μmol/L尼古丁干预，设对照组。第28天收获细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞代谢活力、阿利新蓝特殊染色检测细胞中氨基葡聚糖的含量、实时荧光定量PCR检测软骨分化标志基因（COL2A1、Aggrecan、COL1A1、COL10A1）的表达情况。结果 诱导培养28 d后，MTT法结果示不同浓度尼古丁干预后的各组细胞代谢活力与对照组细胞相比，没有明显改变；当尼古丁作用浓度分别为0、0.1、1、10和100 μmol/L时，其BMSCs海藻酸钠微球的阳性染色区域占切片的百分比分别为90.1%、76.5%、64.8%、44.1%、4.5%；与对照组比较，尼古丁能显著抑制软骨诱导分化下的BMSCs细胞中Aggrecan、COL2A1的表达，同时促进COL1A1、COL10A1的表达（P均＜0.05），并且存在浓度依赖性。结论 尼古丁能够明显抑制大鼠BMSCs的软骨分化，导致其软骨分化质量差。]]> 2017/10/13 20:28:58 59true 目的 探讨下调八聚体结合转录因子4（OCT4）基因对骨肉瘤细胞F5M2增殖能力的影响。方法 采用RNA干扰技术将OCT4基因特异性小干扰RNA（siOCT4）转染到处于对数生长期的F5M2骨肉瘤细胞中作为siOCT4组，并设立siNC组（转染siNC）及空白对照组。采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测并比较siOCT4组和siNC组细胞中的OCT4 mRNA水平及蛋白表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）法检测并比较各组细胞的增殖能力；采用克隆形成试验检测并比较三组细胞的克隆形成能力。结果 siOCT4组中OCT4的mRNA表达水平及蛋白表达水平均较siNC组显著降低；MTT法的实验结果显示：与siNC组及空白对照组比较，siOCT4组细胞的生长曲线显著右移，增殖能力显著低于其他两组；EdU法检测结果显示：siNC组细胞的24 h平均增殖率为48.50%±4.54%，而siOCT4组细胞的24 h平均增殖率为32.30%±1.72%；与空白对照组及siNC组细胞比较，siOCT4组的克隆形成能力显著降低；以上差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。结论 下调骨肉瘤细胞F5M2中OCT4的表达能抑制其细胞的增殖能力。]]> 2017/10/13 20:28:58 58true 目的 探讨不同浓度地塞米松（dexamethasone, DEX）作用不同时间对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）的增殖及成骨、成脂分化的影响。方法 体外分离培养大鼠BMSCs，将状态良好的第三代细胞接种于96孔板中，随机分组为对照组（不加入DEX）及不同浓度（1 nmol/L、10 nmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L）DEX作用组，培养1、3、5、7、9 d后，分别用细胞增殖检测（CCK-8）法检测细胞增殖状况。将BMSCs接种于6孔板中，随机分为对照组及不同浓度（1 nmol/L、10 nmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L）DEX作用组，培养7、14 d后分别用荧光定量PCR方法检测成骨、成脂相关基因的表达，培养14 d后用Western blot检测成骨、成脂相关蛋白的表达。培养5 d后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色，培养14 d后进行油红“O”染色、茜素红染色。结果 较低浓度的DEX促进BMSCs增殖，而较高浓度DEX抑制BMSCs增殖。干预早期，较低浓度的DEX促进BMSCs成骨分化而高浓度DEX抑制其成骨分化；干预晚期，各浓度DEX均促进BMSCs成骨指标的表达，但是不能诱导BMSCs钙质沉积。DEX浓度依赖性地促进BMSCs成脂相关指标基因和蛋白的表达，并诱导BMSCs细胞内脂质沉积。结论 DEX可直接影响BMSCs增殖及向成骨、成脂方向分化，这种效应存在浓度和干预时间依赖性。]]> 2017/8/15 14:39:19 57true 目的 观察Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5（sex determining region Y-box protein 5, SOX5）对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭能力的影响，探讨其在骨肉瘤发病和转移中的作用。方法 本研究为前瞻性研究，通过脂质体介导的基因转染技术将SOX5的三个不同的siRNA（siSOX5-1、siSOX5-2和siSOX5-3）瞬时转染骨肉瘤细胞MG63，转染后48 h检测SOX5的mRNA和蛋白表达，从中挑选出干扰效果最明显的siRNA。进而采用博伊登室实验方法分别对干扰前后的骨肉瘤细胞MG63进行体外细胞迁移和侵袭测定，采用免疫印迹（Western blot）检测迁移和侵袭相关蛋白［基质金属蛋白酶（matrix metallproteinase, MMP）-2、MMP-9、Twist1和Snail1）］的表达水平。结果 3条针对人的siRNA（siSOX5-1、siSOX5-2、siSOX5-3）均能够降低SOX5 mRNA及蛋白水平表达，其中siSOX5-3干扰效果最明显。siSOX5-3干扰组的迁移细胞数为（52±5）较对照组的（107±9）显著减少（P＜0.05），siSOX5-3干扰组的侵袭细胞数为（27±4）较对照组的（71±2）显著减少（P＜0.05）。Western blot结果显示siSOX5-3干扰组的侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9、Twist1和Snail1）的表达均较对照组显著降低（P＜0.05）。结论 SOX5 RNA干扰能显著降低骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力，SOX5能促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。]]> 2017/8/15 14:39:19 56true 目的 通过应用硼硅酸盐生物玻璃13-93B3材料和组织工程技术，探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）结合硼硅酸盐生物玻璃在股骨头坏死修复中的效果。方法 制备硼硅酸盐生物玻璃和成骨诱导的BMSCs复合体。应用新西兰大白兔36只分别建立股骨头坏死动物模型，数字抽签随机分为3组：对照组未植入任何材料；单纯植入组，为在股骨头骨坏死区单纯植入硼硅酸盐玻璃；复合植入组，为在股骨头骨坏死区植入硼硅酸盐玻璃并BMSCs复合体。应用影像学Lane-Sandhu X线片评分和组织学新生骨小梁面积率分析各组术后4、8、12周的股骨头缺损修复情况。结果 对照组在造模后骨坏死缺损区域无明显成骨修复，以纤维组织增生为主，最终股骨头塌陷，第12周的Lane-Sandhu X线片评分为（0.35±0.16）分，新生骨小梁面积率为4.40%±0.34%。单纯植入组硼硅酸盐玻璃逐渐被新生骨替代而降解，骨小梁分布欠均匀、无股骨头塌陷，第12周的Lane-Sandhu X线片评分为（6.41±0.34）分，新生骨小梁面积率为38.10%±1.11%。复合植入组骨缺损区逐渐出现成骨修复反应，复合材料同步降解，骨小梁分布均衡、无股骨头塌陷，第12周的Lane-Sandhu X线片评分为（9.78±0.28）分，新生骨小梁面积率为68.20%±2.16%。通过对第4、8、12周的Lane-Sandhu X线片评分及新生骨小梁面积率统计学分析，复合植入组分别与对照组、单纯植入组比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。单纯植入组和复合植入组在治疗股骨头坏死成骨方面效果好于对照组，其中复合植入组的成骨效果较单纯植入组更好。结论 采用BMSCs复合硼硅酸盐玻璃修复骨缺损将为股骨头坏死治疗提供新的材料及方法，对早期股骨头坏死的治疗有较好的应用前景。但是这一技术若要真正应用于临床实践，仍尚需大量的基础实验进行探索。]]> 2017/4/12 17:06:03 55true 目的 探讨氯离子通道5（chloride channel 5, CLC5）在模拟失重下磷代谢异常致骨丧失的作用机制，为失重性骨代谢异常的防治提供数据参考。方法 ①利用回转器对IDG-SW3骨细胞模拟失重，将骨细胞分为模拟失重组（MG组）和失重对照组（MG-CON组），2 d后采用Real-time PCR检测牙本质基质蛋白1（dentinmatrix protein 1, DMP1）和CLC5在IDG-SW3骨细胞中的表达情况；②利用尾部悬吊法对小鼠模拟失重，将10只1月龄C57BL/6雌性小鼠随机分为悬尾组（SUS组）和空白对照组（CON组），每组5只，4周后取两组小鼠胫骨制作石蜡切片进行CLC5免疫组织化学染色；③2月龄DMP1基因敲除鼠和DMP1转基因鼠各5只（体重为20~25 g），制备胫骨石蜡切片，进行CLC5免疫组织化学染色。结果 Real-time PCR检测结果显示2D回转后DMP1和CLC5在IDG-SW3骨细胞中的表达量均升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；免疫组织化学染色显示CLC5在CON组和SUS组胫骨细胞胞质和基质中均有表达，且SUS组表达量明显高于CON组，差异有统计学意义（P＜0.05）；CLC5在DMP1基因敲除鼠和DMP1转基因鼠骨细胞中的表达也较CON组升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 模拟失重下CLC5参与了DMP1对磷代谢的调控，但其具体作用机制有待于进一步研究。]]> 2017/2/9 9:01:51 54true 目的 观察芬苯达唑对脊髓损伤大鼠的CD45R阳性B细胞、IgG免疫反应以及运动功能恢复的影响。方法 将75只成年雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和芬苯达唑组，每组25例。假手术组、模型对照组术前4周给予常规啮齿动物饲料喂食（含18%蛋白质的饲料），芬苯达唑组术前4周给予加入芬苯达唑的常规啮齿动物饲料喂食。用Allen法构建脊髓损伤模型，分别于术后第1、7、14、21、28天行Basso-Beatti-Bresnahan（BBB）运动功能评估，利用免疫组化检测损伤部位脊髓组织中IgG的表达水平，利用免疫荧光检测脊髓损伤部位CD45R阳性B细胞的信号水平。结果 脊髓损伤后，模型对照组和芬苯达唑组的BBB评分均显著低于假手术组（均P＜0.05），随着时间的延长，两组的BBB运动评分均逐渐有所恢复，但仍低于假手术组；脊髓损伤后第1天，模型对照组与芬苯达唑组的BBB运动评分分别为（3.10±0.29）分、（3.23±0.48）分，差异尚无统计学意义；而在脊髓损伤后的第7、14、21、28天，芬苯达唑组的BBB评分均高于模型对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。免疫组化检查证实损伤部位脊髓标本的IgG水平显著升高，第7天开始，芬苯达唑组各个时间点的IgG免疫反应水平均低于模型对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。免疫荧光检查证实脊髓损伤后损伤部位脊髓节段CD45R阳性B细胞信号水平显著升高，第7天开始，芬苯达唑组各个时间点脊髓损伤部位的CD45R阳性B细胞的信号水平均低于模型对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 芬苯达唑预处理可降低脊髓组织中IgG的表达水平及脊髓损伤部位的CD45R阳性B细胞的信号水平，促进脊髓损伤后的神经功能恢复。]]> 2017/2/9 9:01:51 53true 目的 探究初级纤毛和自噬在软骨细胞中的表达关系，以及调控初级纤毛表达对软骨细胞自噬的影响。方法 首先通过免疫荧光染色检测软骨细胞中自噬小体和初级纤毛的表达水平及二者在软骨细胞分裂周期中的定位表达关系；通过使用无血清培养基诱导初级纤毛表达，水合氯醛破坏纤毛结构后，统计分析初级纤毛发生率、长度和自噬的表达，Western blot法检测初级纤毛和自噬相关蛋白IFT88、Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达情况。结果 软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的共表达，初级纤毛的表达率为（62.16±11.74）%，长度为（2.342±0.392） μm，单个细胞内自噬的相对表达量为26.38±5.31；在软骨细胞分裂周期中，自噬小体的数量、大小和分布会随着初级纤毛的解聚和重构发生变化；无血清培养基可诱导初级纤毛表达率上调，促进纤毛延长，同时会上调软骨细胞自噬水平及IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ的表达，而水合氯醛破坏纤毛结构后，初级纤毛表达率和长度下调，细胞自噬表达下调，同时抑制IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结论 在软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的定位表达关联性，调控初级纤毛的表达会影响软骨细胞的自噬水平。]]> 2018/11/15 18:52:16 52true 目的 研究核心蛋白聚糖（decorin, DCN）对创伤性膝关节粘连的影响。方法 采用36只新西兰兔建立动物模型，首先用手术刀片切除髌上囊前壁的滑膜组织，再用骨膜剥离子剥离髌上囊后壁在股骨前方的结合部，去除少量髌上囊后壁和髌下脂肪垫。切除前后交叉韧带，并将膝关节过伸45°以破坏后方的关节囊。最后，使用1.6 mm克氏针将膝关节完全固定于屈曲位。36只动物平均分为3组，其中2组每隔1 d分别向膝关节腔内注射100 nmol/L（100 nmol/L DCN组）、200 nmol/L（200 nmol/L DCN组）的DCN，各1 ml，共15次，对照组注射生理盐水。术后8周处死动物，测量各组动物的膝关节活动度，检测髌上囊前壁滑膜组织中的胶原含量，并对髌上囊前壁滑膜组织进行组织学分析，以了解DCN对膝关节粘连进程的影响。结果 术后8周，100 nmol/L DCN组和200 nmol/L DCN组的关节活动度分别为56.27°±10.30°和62.23°±14.08°，均显著高于对照组的31.14°±11.57°；2个实验组髌上囊前壁滑膜组织中的新生血管数量及纤维组织比例显著低于对照组；对照组髌上囊前壁滑膜组织中的胶原含量为（42.15±6.78） μg/mg，亦显著高于2个实验组[（30.24±8.12） μg/mg和（24.19±6.89） μg/mg]。2个实验组与对照组比较，上述几项指标的差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 关节腔内运用DCN治疗可明显改善兔膝关节粘连及强直的程度，从而增加关节活动度。]]> 2018/10/11 15:22:19 51true 目的 探讨用人骨形态发生蛋白7（human bone morphogenetic protein 7, hBMP7）基因修饰的犬髓核细胞与同种异体椎间盘复合后体内原位移植的方法阻止或延缓同种异体椎间盘移植后退变的能力。方法 将18个比格犬椎间盘（L4-5）置于-196 ℃冻存液中保存2个月，随机分为A、B、C三组，A组以rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞，将能够表达hBMP7蛋白的髓核细胞悬液（5×10⁶ 个/ml，20 μl）注射入复温后的椎间盘中体外培养，B组以相同数量未转染的hBMP7的髓核细胞注入椎间盘后体外培养，C组以20 μl DMEM/F12细胞培养液生理盐水注射后体外培养。将培养7 d的3组椎间盘分别移植至15只比格犬的L4-5，在术前、术后即刻及术后1、3、6个月通过X线检测移植椎间盘的愈合情况及其高度变化；通过MRI T2像分析椎间盘的退变情况；术后6个月时处死动物取材，分析腰椎屈伸、侧弯及扭转的生物力学变化；组织学染色检测椎间盘的结构及退变情况；PCR法检测3组髓核组织中hBMP7 mRNA的表达。结果 X线检测显示3组移植椎间盘高度变化指数（DHVI）差异无统计学意义（P＞0.05）；MRI检测结果显示：在术后12、24周时，B、C两组移植椎间盘的MRI T2像信号灰度比明显低于A组（P＜0.05）；生物力学检测结果显示：C组的左右扭转度明显大于A、B组（P＜0.05），而A、B两组间的差异无统计学意义（P＞0.05），而对屈伸及侧弯活动度检测发现3组间差异无统计学意义；PCR检测结果显示：6个月时A组仍可检测到hBMP mRNA的高表达；组织学检测结果显示：移植后6个月时仍有外源性髓核细胞存活，A组相对于B、C两组髓核结构更加完整，所含细胞外基质更多。结论 表达hBMP7的髓核细胞能阻止同种异体椎间盘移植后的退变性。]]> 2018/8/1 12:53:34 50true 目的 建立个性化3D打印多孔钛合金加强块重建重度髋臼骨缺损有限元模型，分析个性化3D打印多孔钛合金加强块、螺钉以及骨的生物力学和临床应用安全性。方法 利用1例Paprosky ⅢA型髋臼骨缺损病人的骨盆CT数据建立完整的个性化3D打印多孔钛合金加强块重建重度髋臼骨缺损有限元模型，模拟1倍体重（单足站立）、4倍体重（步行）和6倍体重（慢跑）加载负荷下分析加强块、螺钉以及骨的应力分布。结果 个性化3D打印多孔钛合金加强块的最大应力分布为10.130 MPa（1倍体重）、40.706 MPa（4倍体重）和61.213 MPa（6倍体重），固定加强块的螺钉最大应力分布为12.424 MPa（1倍体重）、50.250 MPa（4倍体重）和75.860 MPa（6倍体重），骨面应力分布最大应力分布为10.439 MPa（1倍体重）、42.627 MPa（4倍体重）和64.554 MPa（6倍体重）。结论 有限元模拟术后即刻完全负重站立时所有部件的应力分布均小于其屈服强度，不会发生失效；但是于步行和慢跑加载负荷下，与加强块和螺钉接触骨面的部分区域松质骨会发生失效。因此从有限元分析角度考虑，病人术后即刻可以进行完全负重站立康复锻炼，但是不能进行完全负重的步行或慢跑康复运动。]]> 2018/6/5 10:21:30 49true 目的 探讨氨来呫诺调控大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化的作用，为其在抗骨质疏松治疗等方面的应用提供理论依据。方法 体外分离、培养SD大鼠BMSCs。①通过CCK8法检测不同浓度氨来呫诺对BMSCs增殖的影响；②设置对照组和氨来呫诺（25 μmol/L）处理组，利用成骨诱导培养基进行诱导，诱导后第10天进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色检测；诱导后第21天进行茜素红染色；③实时荧光定量PCR检测诱导后第3、7、14天成骨分化相关基因ALP、Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2, RUNX2）、骨桥蛋白（osteopontin, OPN）的表达水平。结果 ①CCK8检测结果显示25 μmol/L氨来呫诺对BMSCs增殖没有明显影响，50 μmol/L氨来呫诺显著抑制BMSCs的增殖，故在后续实验中均采用25 μmol/L氨来呫诺作为效应浓度。②干预后第10天，氨来呫诺处理组较对照组的ALP染色阳性面积明显增多；干预后第21天，氨来呫诺处理组较对照组的钙结节形成密集，钙结节数目明显增多。③干预后第7天，氨来呫诺处理组较对照组中ALP的表达显著提高；第14天时，氨来呫诺处理组较对照组中RUNX2、OPN的表达显著提高。结论 氨来呫诺可能通过促进BMSCs成骨分化相关基因表达，进而促进BMSCs细胞中ALP的表达和钙结节形成，促进BMSCs成骨分化。]]> 2018/6/5 10:21:30 48true 目的 明确miR-542-3p对骨肉瘤细胞系HOS和SAOS2细胞侵袭能力的影响，通过生物信息学建立miR-542-3p靶基因调控网络，并探讨其潜在作用靶点。方法 使用miR-542-3p mimics转染HOS和SAOS2细胞，同时设立正常组（未转染）及阴性对照组（转染miR-neg mimics），Transwell小室试验检测转染后细胞的侵袭能力。通过美国国立生物信息中心（NCBI）基因表达共享数据库（GEO）联合GEO2R平台，获取并分析miRNA-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的基因表达谱数据及其差异表达基因，进而使用miRNA预测数据库及Cytoscape软件，预测并建立miR-542-3p靶基因调控网络。实时荧光定量PCR验证miR-542-3p转染HOS和SAOS2细胞后，部分预测目标靶基因的mRNA表达水平变化。结果 miR-542-3p干预组HOS和SAOS2细胞的侵袭能力较正常组和阴性对照组明显降低（P均＜0.05）。数据库差异基因分析表明，miR-542-3p与miR-neg转染的U2OS细胞的表达差异基因共有417个，其中185个基因表达下调。miRNA预测数据库预测的266个靶基因中，有14个与差异基因分析中得到的表达下调基因重合。实时荧光定量PCR分析得出，ILK、TBPL1、ETS1这3个预测靶基因在miR-542-3p干预组中的表达水平显著低于阴性对照组，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 miR-542-3p通过下调ILK、TBPL1、ETS1显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力。]]> 2018/2/9 14:35:38 47true 目的 观察太赫兹波在人成骨肉瘤细胞株MG-63荷瘤小鼠活体瘤体组织显像中的应用效果，并探讨太赫兹波技术在肿瘤组织切除术中的指导作用。方法 利用华中科技大学武汉光电国家实验室连续太赫兹波成像系统，进行人成骨肉瘤细胞株MG-63荷瘤小鼠活体的瘤体显像。实验组小鼠（8只）在太赫兹成像系统指导下进行瘤体切除术，对照组（8只）常规肉眼下行瘤体切除术，术后将切除的肿瘤组织和切除肿瘤后的边界组织送病理切片；继续观察两组小鼠术后的生长情况以及肿瘤原位复发情况。结果 人成骨肉瘤MG-63荷瘤小鼠在太赫兹波成像检测下，瘤体组织处出现强烈吸收信号，吸收强度明显高于健康组织；实验组术后原瘤体部位的强吸收信号消失，对照组术后原瘤体部位的吸收信号明显减弱，但周边仍存留散在较强的吸收区域。实验组切除组织边缘取材的肿瘤阳性率为8.3%，远低于对照组的37.5%，差异有统计学意义（P＜0.05）。后续观察中，实验组和对照组分别死亡1只、2只小鼠，两组死亡率的差异无统计学意义，但两组的肿瘤复发率的差异存在统计学意义（P=0.038）。结论 太赫兹波成像技术能对MG-63荷瘤小鼠中骨肉瘤肿瘤组织进行活体即时显像，能指导有效手术切除恶性肿瘤组织，具有很好的临床应用前景。]]> 2018/2/9 14:35:38 46true 目的 研究显微CT采用不同阈值范围对评价生物活性玻璃植入兔体后成骨结果的影响，探讨阈值范围选择的重要性及解决方法。方法 采用新西兰大白兔股骨髁缺损模型，植入生物活性玻璃，3个月后完整取出。采用显微CT对取出的植骨材料进行扫描，分别采用不同阈值范围代表新骨和剩余材料，分为A、B、C、D、E、F 6个实验组，分析不同组之间的新生骨体积百分比及剩余材料体积百分比的差异；显微CT扫描后，将材料制作为不脱钙组织切片，进行Van Gieson染色，用Image-Pro Plus图像分析软件对切片的新生骨百分比进行测量和分析并作为对照组，对实验组与对照组之间进行相关性分析。结果 6个实验组的新生骨体积百分比分别为17.96%±1.23%、20.36%±1.66%、22.04%±2.22%、23.16%±1.34%、26.48%±1.38%、28.91%±2.10%，对照组组织学结果为21.33%±1.25%，相关性分析结果为C组与对照组相关性最高（r=0.867，P＜0.05）。结论 不同阈值范围分析生物活性玻璃成骨能力具有较大差异，选用骨组织1 200~2 700、剩余材料≥2 700的阈值范围，与组织学结果相关性最高。在研究中需结合组织病理学切片及显微CT类型，选取合适阈值范围，以便采用显微CT进行进一步分析。]]> 2019/12/19 8:57:01 45true 目的 研究白细胞介素23（interleukin-23，IL-23）对间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）成骨分化的作用，并探讨其机制。方法 分离培养小鼠骨髓MSC，在IL-23刺激下进行成骨诱导分化，通过茜素红实验与碱性磷酸酶实验明确其成骨分化能力；通过全基因组表达谱芯片检测IL-23刺激下MSC成骨分化过程中的基因表达谱，筛选IL-23调控MSC成骨分化的关键基因，并通过荧光定量PCR加以验证；通过siRNA干扰关键基因Smad4表达，并用茜素红实验与碱性磷酸酶实验明确MSC成骨分化能力改变。结果 在成骨诱导分化条件下，IL-23刺激的MSC茜素红实验与碱性磷酸酶实验结果均显著高于无IL-23刺激的对照组；全基因组表达谱芯片结果显示，IL-23刺激下MSC成骨分化过程中Smad4表达明显上调；siRNA干扰Smad4表达后，IL-23刺激引起的MSC成骨能力增强被明显抑制。结论 IL-23通过上调Smad4表达以促进MSC成骨分化。]]> 2019/12/19 8:57:01 44true 目的 观察低频振动对小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化的影响。方法 取3周龄C57BL/6小鼠，分离及培养其BMSCs。将细胞分为两组，对照组及低频振动组，两组均诱导BMSCs进行成骨分化，低频振动组在诱导过程中实施低频振动干预（15 Hz，垂直加速度0.3 g），对照组不进行干预，分别于第7天、第14天收获细胞，将第7天的细胞进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色，将第14天的细胞进行茜素红染色；并利用Real-time PCR检测相关基因表达。结果 低频振动组细胞第7天的ALP活性明显高于对照组，且在14 d形成的钙结节多于对照组；所检测基因中，低频振动组细胞Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白、骨钙素、骨保护素基因的表达均高于对照组，而破骨细胞分化因子（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）较对照组低。结论 低频振动可以促进BMSCs的成骨分化，并调节成骨细胞分泌的细胞因子，影响破骨细胞的生成。]]> 2019/10/10 15:11:14 43true 目的 利用犬活体动物模型探讨寰枢椎前路可动固定系统假体长期放置后的力学稳定性及组织相容性，为进一步临床应用提供理论依据。方法 18只正常成年雄性杂交犬随机分为正常对照组、寰枢椎前路可动固定组和Harms固定融合组，分别施行假手术、可动固定术及Harms钢板固定融合术。各组实验犬饲养12周后处死，取可动固定组及正常对照组假体邻近软组织、引流淋巴结、脾脏、肝脏组织行HE染色，取可动固定组颈椎标本行硬组织切片染色，观察假体组织相容性；取新鲜颈椎标本（C₀~C₂）制备生物力学测试模型，在MTS 858生物材料试验机上测定各组颈椎标本的三维运动范围与中性区。结果 HE染色结果显示可动固定组假体周围组织、引流淋巴结、脾脏、肝脏均正常，无含铁血黄素沉积，无炎症反应，未见金属颗粒。硬组织切片染色可见可动固定假体周围无炎症反应，假体骨组织界面无松动。生物力学测试结果显示，前路可动固定术后，寰枢椎在屈伸、侧屈及旋转运动下的运动范围和中性区与完整状态相似，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 寰枢椎前路可动固定系统具有良好的组织相容性，低磨损，能够在活体内长期稳定放置的基础上保留寰枢椎的运动功能。]]> 2019/8/7 15:05:10 42true 目的 研究白细胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）和低频电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化的影响。方法 取第三代大鼠BMSCs置于6孔板培养并随机分为4组：对照组、IL-1β组、电磁场组和IL-1β+电磁场组。IL-1β组和IL-1β+电磁场组在每次换新鲜培养基时加入1 ng/ml IL-1β，电磁场组和IL-1β+电磁场组每天给予15 Hz/1 mT的低频正弦波电磁场刺激4 h。培养3 d后提取RNA和蛋白质，用实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨桥蛋白（osteopontin, OPN）及Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2, Runx2）的mRNA表达。Western blotting检测Runx2和OPN的蛋白表达。培养7 d后检测ALP、OPN及Runx2的mRNA表达。另取两组细胞，分别加入1 ng/ml的IL-1β，1 ng/ml的IL-1β+抑制剂SB203580后，给予15 Hz/1 mT的低频正弦波电磁场刺激并分别于0、5、15、30、60及120 min提取蛋白质，用Western blotting检测磷酸化p38的蛋白表达。结果 培养3 d后，IL-1β组、电磁场组和IL-1β+电磁场组中ALP、OPN的mRNA的表达量与对照组相比均有明显增高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组相比，电磁场组和IL-1β+电磁场组中Runx2的mRNA的表达量明显升高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组相比，IL-1β组、电磁场组和IL-1β+电磁场组中OPN、Runx2蛋白的表达量均明显增高。培养7 d后，与对照组相比，IL-1β组和IL-1β+电磁场组中ALP的mRNA表达均降低，在电磁场组则升高（P＜0.05）；IL-1β组、电磁场组和IL-1β+电磁场组中OPN的mRNA表达与对照组相比均增高（P均＜0.05）；Runx2的基因的表达量在IL-1β组及IL-1β+电磁场组较对照组均降低，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。磷酸化的p38在第30、60、120 min时的蛋白质表达较0 min时升高（P＜0.05），使用p38抑制剂SB203580后磷酸化的p38表达无明显变化。结论 IL-1β和电磁场可以在早期促进大鼠BMSCs的ALP、OPN、Runx2的表达，IL-1β和电磁场可以激活磷酸化的p38。]]> 2019/8/7 15:05:10 41true 目的 探究鲨鱼软骨粉对白细胞介素（IL）-1β诱导的人软骨细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 分别用浓度为0.1、0.2、1、5、10 mg/ml的鲨鱼软骨粉溶液干预软骨细胞48 h，采用MTS法检测不同浓度的鲨鱼软骨粉溶液对软骨细胞增殖的影响。将软骨细胞分为3组，对照组只加入培养基；IL-1β组，加入10 ng/ml IL-1β；鲨鱼软骨粉组，加入10 ng/ml IL-1β和5 mg/ml鲨鱼软骨粉溶液。流式细胞术检测各组细胞凋亡及细胞周期分布情况，Western blot检测signal transducers and activators of transcription 3（STAT3），p65， extracellular regulated protein kinases（ERK），p-STAT3，p-p65，p-ERK，B-cell lymphoma-extra large（Bcl-xl）和Survivin表达情况。结果 鲨鱼软骨粉溶液能明显促进软骨细胞生长，且浓度为5 mg/ml时效果最明显（P＜0.001）。与IL-1β组比较，鲨鱼软骨粉组细胞凋亡明显减少（P＜0.001），STAT3， p65，ERK磷酸化明显减少（P＜0.05，P＜0.001，P＜0.05），Bcl-xl、Survivin蛋白表达增加（P均＜0.01）。结论 鲨鱼软骨粉溶液能够抑制STAT3，p65，ERK磷酸化，并增加Bcl-xl、Survivin蛋白表达，从而抑制软骨细胞凋亡。]]> 2019/6/3 15:26:15 40true 目的 研究缺氧条件下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）和Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）蛋白在软骨细胞表型维持中的作用。方法 生长板软骨细胞取自7日龄的SD大鼠，并通过氯化钴干预以模拟体外缺氧微环境。通过检测细胞外基质水平和Ⅱ型胶原（Collagen 2, Col2）蛋白水平表达变化来确定软骨细胞在氯化钴刺激下软骨表型变化。通过Western blotting方法检测HIF-1α、YAP蛋白水平在氯化钴刺激后的表达变化。结果 氯化钴于体外实验中模拟的缺氧环境能够促进软骨细胞细胞外基质的表达水平，并且能够上调Col2蛋白表达，同时上调HIF-1α和YAP蛋白水平的表达。抑制HIF-1α的表达可以下调缺氧环境所致的YAP蛋白表达水平的上调，而抑制YAP的表达并不能影响HIF-1α蛋白表达水平。结论 氯化钴于体外实验中模拟的缺氧环境可能通过HIF-1α/YAP信号促进大鼠生长板软骨细胞软骨表型的维持。]]> 2019/4/2 11:36:51 39true 目的 通过生物力学测试明确双侧锁定接骨板治疗干骺端粉碎性股骨远端骨折的各项力学特性。方法 采用16根力学测试专用股骨建立干骺端粉碎性股骨远端骨折（AO分型为C2.3型）模型，分为2组，对照组为单纯外侧解剖锁定接骨板固定，观察组为外侧解剖锁定接骨板和内侧锁定加压接骨板联合固定，每组8根人工骨，其中5根依次进行扭转负荷测试、轴向负荷测试和循环轴向负荷测试，检测扭转刚度、轴向刚度、股骨远端内侧压缩位移和内侧骨折端的微动；剩余3根进行极限负荷测试，记录内固定失败时的最大载荷。结果 ①扭转及垂直负荷测试中，观察组的扭转及轴向刚度分别为（4.28±0.43） Nm/deg、（1 850.14±99.88） N/mm，明显高于对照组的（2.26±0.09） Nm/deg、（884.02±68.15） N/mm；②轴向循环负荷测试中，两组模型均未出现螺钉松动或钢板断裂等内固定失败的情况，但对照组骨折端内侧间隙缩小（1.54±0.24） mm，明显大于观察组的（0.15±0.08） mm；③对照组内侧骨折块的微动位移为（3.25±0.21） mm，也明显高于观察组的（0.17±0.05） mm；④轴向极限负荷测试中，观察组发生骨折间隙明显缩窄或内固定失败时的极限载荷为（18 118.33±133.33） N，明显高于对照组的（6 334.33±34.39） N。上述数据组间比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 双侧锁定接骨板固定干骺端粉碎性股骨远端骨折可明显增加固定强度，从而为骨折愈合提供更稳定的生物力学环境。]]> 2019/1/31 15:17:00 38true 目的 制备一种生物相容性良好的光交联的聚酯弹性体材料，探究其力学性能以及细胞相容性。方法 通过熔融缩聚方法合成含有双键、可降解的亲疏水片段聚合物，并引入无机纳米颗粒制备有机-无机一体化的复合聚酯弹性体材料（聚辛二醇-柠檬酸-衣康酸）。利用核磁共振氢谱（Hydrogen-1 Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry, H1-NMR）、力学分析仪、流变仪研究聚酯弹性体的结构、抗压以及粘弹性能。研究该弹性体对特立帕肽（PTH）的包载和释放，并研究其药物释放特性和体外生物相容性。结果 H1-NMR结果表明弹性体中含有双键，可以实现光交联固化，压缩模量约为23 MPa，且具有稳定的粘弹性能，其储能模量约为90 kPa。体外细胞实验表明，该材料具有良好的生物相容性，通过负载PTH药物，前期呈快速释放，随后减慢，总释放率达60%。结论 本研究制备的有机-无机复合弹性体具有优良的力学性能和良好的生物相容性可实现细胞在其表面生长，同时可作为某些药物的载体，有望成为一种良好的骨缺损修复支架材料。]]> 2020/10/6 9:50:16 37true 目的 体外分离培养大鼠及兔膝关节软骨细胞，观察并比较两种软骨细胞的培养特点。方法 采用机械-酶消化法处理SD大鼠幼鼠和新西兰兔的软骨组织，传代培养，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数法测定生长曲线，实时定量PCR测定不同代数的软骨细胞Ⅱ型胶原与含血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶5（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5, ADAMTS5）表达水平，甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果 原代培养大鼠软骨细胞12 h，内贴壁成多角形或不规则型，排列成“铺路石”状，培养3~5 d后进入快速增殖期，1周后进行细胞传代培养。兔软骨细胞相对贴壁缓慢，生长滞后。两类软骨细胞随着培养代数的增加，Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达量逐渐减少，ADAMTS5的表达逐代升高，表明随着培养代数的增加，软骨细胞活力逐渐下降。相同代数的大鼠软骨细胞活性较兔软骨细胞更高。甲苯胺蓝染色可见大鼠软骨细胞内成蓝色异染的糖胺多糖成分。不同波段的荧光激发下，Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色可见大鼠原代培养的软骨细胞胞浆和胞膜呈清晰的绿色荧光，兔软骨细胞呈红色荧光，细胞核为明亮的蓝色荧光。结论 本实验通过比较大鼠及新西兰兔软骨细胞的培养与特点，证实随培养代数增加，软骨细胞活性逐渐降低，且相同代数大鼠软骨细胞较兔软骨细胞具备更高活性。]]> 2020/7/30 14:36:41 36true 目的 观察热疗联合特异性siRNA沉默趋化因子受体4（chemokine receptor 4, CXCR4）对骨肉瘤增殖和侵袭的影响。方法 培养人骨肉瘤细胞株MG-63至对数生长期，接种于6孔板中，分为三组，空白组细胞不进行任何处理常规培养，control siRNA组以control siRNA转染细胞，CXCR4 siRNA组以CXCR4 siRNA转染细胞，采用Western blot检测各组CXCR4的表达变化，评估CXCR4 siRNA转染效能。细胞及体内实验设置control siRNA组（对照组）、热疗联合CXCR4 siRNA组（联合组）、CXCR4 siRNA组（沉默组）和热疗组，以CXCR4 siRNA转染沉默组和联合组的细胞，control siRNA转染对照组细胞，热疗组和联合组进行热疗处理。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）和Western blot检测各组细胞CXCR4的表达变化。CCK-8法和Transwell侵袭实验检测转染后MG-63细胞的增殖能力和侵袭能力变化。流式细胞技术检测转染后MG-63细胞的周期变化。体外裸鼠成瘤实验和肿瘤生长曲线观察转染后MG-63细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长情况。结果 CXCR4 siRNA可以有效沉默MG-63细胞中CXCR4 蛋白的表达。热疗联合CXCR4 siRNA有效沉默MG-63细胞中CXCR4的表达并能抑制MG-63细胞增殖和侵袭，阻滞细胞周期于G0/G1期（P均＜0.05）。体内实验结果显示，从第14天起，联合组裸鼠骨肉瘤体积逐渐小于对照组、沉默组和热疗组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。联合组的瘤重也低于对照组、沉默组和热疗组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。结论 热疗联合特异性沉默CXCR4抑制骨肉瘤的增殖和侵袭，可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗新方法。]]> 2020/4/3 14:33:59 35true 目的 探讨缝隙连接蛋白43（connexin 43, Cx43）对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化的影响。方法 将Cx43目的基因克隆后与慢病毒载体pHBLV-CMVIE-Puro进行连接，重组载体与包装载体共同转染293T细胞后包装生产病毒。获取小鼠BMSCs，流式细胞术检测细胞表面标志。将慢病毒载体pHBLV-Cx43-Puro（Cx43组）、pHBLV-CMVIE-Puro（空载体组）转染BMSCs，同时设立空白对照组；Western blot和qRT-PCR检测三组细胞中Cx43的表达。成骨诱导培养基诱导三组细胞成骨分化，qRT-PCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2, Runx2）、锌指结构转录因子（Osterix/Sp7）、转录活化因子4（activating transcription factor 4, ATF4）、骨唾蛋白（bone sialoprotein, BSP）的表达；碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性检测试剂盒定量分析三组BMSCs的成骨分化能力。结果 流式细胞术检查示BMSCs中CD29、CD44、CD90呈阳性表达，而CD14和CD34呈阴性表达，pHBLV-Cx43-Puro转染BMSCs后Cx43蛋白和mRNA表达显著增加。成骨诱导后Cx43组成骨相关基因Runx2、Osterix/Sp7、ATF4和BSP的mRNA表达显著高于其他两组（P均＜0.05），ALP活性明显高于其他两组（P＜0.05）。结论 Cx43高表达能够显著促进BMSCs向成骨细胞分化，其可能成为骨损伤修复的有效靶点。]]> 2020/4/3 14:33:59 34true 目的 探究初级纤毛在成纤维细胞生长因子18（fibroblast growth factor 18, FGF 18）介导的软骨细胞增殖和表型调控中的作用及机制。方法 通过CCK8法和免疫荧光染色检测不同浓度FGF18对大鼠软骨细胞增殖和初级纤毛表达的影响；设置对照组、FGF18组、水合氯醛组和FGF18+水合氯醛组，通过免疫荧光染色检测初级纤毛表达，甲苯胺蓝染色检测细胞外基质分泌，Live/dead实验检测细胞活性，qPCR检测成软骨相关基因COL Ⅱ和SOX9的表达变化，Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、表型蛋白COL Ⅱ和细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases, ERK）通路蛋白表达。结果 不同浓度FGF18对软骨细胞增殖均有促进作用，20 ng/ml时效应最明显；FGF18能下调初级纤毛的发生率（0 ng/ml，77.91%±5.53%；5 ng/ml，52.91%±5.61%；10 ng/ml，42.12%±5.20%；20 ng/ml，36.53%±4.88%；40 ng/ml，33.44%±5.98%），但上调其平均长度[0 ng/ml，（1.63±0.67） μm；5 ng/ml，（2.67±0.90） μm；10 ng/ml，（2.71±0.97） μm；20 ng/ml，（2.76±1.37） μm；40 ng/ml，（2.79±1.13） μm]；FGF18能维持细胞活性并促进细胞外基质分泌，上调COLⅡ和SOX9基因表达；但水合氯醛破坏初级纤毛结构后，纤毛发生率为（9.10±2.44）%，活细胞占比为72.86%±2.95%，水合氯醛+FGF18组纤毛发生率为（10.01±2.23）%，活细胞占比为（76.94±5.62）%，相比对照组[纤毛发生率为（77.91±5.53）%，活细胞占比为（96.81±1.38）%]和FGF18组[纤毛发生率为（36.53%±4.88）%，活细胞占比为（96.29±2.17）%]均明显降低，同时，FGF18的促增殖和促基质分泌作用受到抑制，COL Ⅱ和SOX9基因表达下调；FGF18能促进CyclinD1、COL Ⅱ蛋白表达，并上调P-ERK/T-ERK的比值，破坏纤毛结构则抑制FGF18对相关蛋白的促表达效应。结论 FGF18能促进软骨细胞增殖和维持软骨表型，并且初级纤毛参与FGF18介导的软骨细胞生长发育调控。]]> 2020/2/25 15:13:14 33true 目的 探究Indian Hedgehog（IHH）信号通路对软骨内成骨过程中软骨细胞成熟以及转分化的影响。方法 取10日龄野生型小鼠的胫骨组织，采用原位杂交和免疫组织化学染色检测生长板区域IHH信号通路相关分子Ihh、Ptch1和Gli1的表达水平。构建肥大软骨细胞特异性Ihh基因敲除小鼠（Col10a1^Cre/+; Ihh^null/C），并采用影像学检查和阿利新蓝染色评估该小鼠的骨骼发育状况。构建肥大软骨细胞IHH信号通路持续激活小鼠（Col10a1^Cre/+; R26Smo^M2/M2和 Col10a1^Cre/+; Ptch1^LacZ/C），采用HE染色、原位杂交和TUNEL染色分别对受精15.5天胎鼠胫骨组织形态结构、Ihh（肥大软骨细胞分子标志物）和Col1a1（成骨细胞分子标志物）以及肥大软骨细胞凋亡水平进行检测；另外应用HE染色对10日龄小鼠的胫骨组织进行组织学分析。结果 肥大软骨细胞合成分泌IHH，但不表达Ptch1和Gli1。抑制肥大软骨细胞合成IHH蛋白会导致出生后小鼠出现侏儒症；X线检查结果显示小鼠出现严重的骨骼发育不良，包括胸廓狭小、球形头骨以及椎骨发育异常等表现。持续启动IHH信号通路时，胚胎早期软骨细胞成熟分化过程虽未见异常，但是出生后小鼠的骨小梁、骨内膜以及皮质骨等结构均出现一定的异常表现。结论 IHH信号通路虽然不参与肥大软骨细胞的终末分化过程，但在软骨细胞转分化的过程中起到了重要的调控作用。]]> 2021/11/29 11:01:24 32true 目的 构建可缓释血小板衍生生长因子（PDGF）的可注射复合成骨水凝胶，验证其体内外成骨再生效应。方法 通过简单共混纳米锂钙石（SN）、PDGF与甲基丙烯酸化明胶（GelMA），构建可注射复合水凝胶（GelMA-SN-PDGF），并进一步通过紫外光交联优化水凝胶力学性能。扫描电子显微镜、流变仪、万能力学试验机等分析GelMA-SN-PDGF的理化属性和力学性能；ELISA法测定复合水凝胶的PDGF缓释曲线，Transwell和划痕实验验证复合水凝胶的趋化性能；CCK-8法、Live/Dead染色法、DAPI-Phalloidin染色法评估GelMA-SN-PDGF的生物相容性；qRT-PCR和免疫荧光染色标记法评估GelMA-SN-PDGF的体外成骨能力，茜素红染色法分析其基质矿化能力。建立大鼠颅骨临界骨缺损模型并通过Micro-CT和Masson三色染色分析GelMA-SN-PDGF的体内成骨能力。结果 GelMA-SN-PDGF复合水凝胶制备简易，能通过注射器注射，SN和PDGF的加入并未显著影响GelMA支架结构，紫外光交联后的GelMA支架满足骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的力学环境；PDGF在复合水凝胶中实现了理想的长期控释模式，并有效地刺激了BMSCs的归巢。GelMA-SN-PDGF复合水凝胶在体外促进了BMSCs中成骨相关标志物的表达和基质矿化，并展现了较好的体内临界骨缺损修复能力。结论 可注射的GelMA-SN-PDGF复合水凝胶具有良好的生物相容性和生物活性，能通过注射器微创修复骨缺损，体内外成骨效应较好，为临床骨缺损治疗提供了一种简单而快速的策略。]]> 2021/8/3 9:32:32 31true 目的 利用T2 mapping和T2^* mapping探究雌雄性正常大鼠椎间盘微细结构的差异。方法 选用12只正常成年雌性SD大鼠和10只正常成年雄性SD大鼠，运用T2 mapping和T2^* mapping技术对正常大鼠的第6、7尾椎椎间盘C_6/7和第7、8尾椎椎间盘C_7/8进行扫描，并通过画取感兴趣区域的方法获得相应椎间盘的T2值和T2^*值。同时对椎间盘进行T2加权矢状位扫描，采用Pfirrmann分级法进行分级评价。最后对椎间盘进行病理检测，获取雌雄性大鼠的椎间盘病理切片结果。结果 雌性大鼠的24个椎间盘中有14个（58%）属于Ⅰ级，10个（42%）属于Ⅱ级；雄性大鼠的20个椎间盘中有14个（70%）属于Ⅰ级，6个（30%）属于Ⅱ级。在Ⅰ级和Ⅱ级椎间盘中，雌性大鼠的T2值和T2^*值都明显小于雄性大鼠，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。雄性大鼠的椎间盘形态较雌性大鼠细长，而椎间盘微细结构中，雄性大鼠椎间盘中的纤维含量比雌性大鼠要少。结论 不同性别正常成年大鼠的椎间盘存在明显差异，而且正常成年的雌雄性大鼠的椎间盘均可能发生退变，故在进行椎间盘相关的动物实验前，应当选择同性别实验大鼠进行实验，并对实验大鼠提前进行MRI检测，选取具有相同退变程度的实验大鼠。]]> 2021/8/3 9:32:32 30true 目的 探究γ-分泌酶抑制剂DAPT对人骨肉瘤143B细胞和MG63细胞迁移的影响。方法 首先采用免疫荧光和免疫组化分别检测MG63细胞、143B细胞和人骨肉瘤体内肺转移临床标本Notch1的表达情况，再用DAPT和Notch通路的激动剂Jagged1处理143B细胞和MG63细胞，分别用划痕试验和Transwell迁移实验观察细胞迁移变化，最后通过裸鼠体内实验检测DAPT对MG63细胞体内转移侵袭能力的影响。结果 DAPT能够明显抑制143B细胞和MG63细胞划痕愈合能力以及跨膜迁移能力，MG63细胞的体内肺部转移瘤也在DAPT的作用下明显减小。结论 DAPT可以抑制143B细胞和MG63细胞的体外迁移以及体内转移侵袭能力。]]> 2021/6/2 10:37:46 29true 目的 探究铁死亡在压力诱导的椎间盘退变中的作用及其分子作用机制。方法 将髓核细胞分为对照组、加压组和加压+铁死亡抑制剂（Fer-1）组，采用CCK-8法检测细胞增殖活力，透射电镜观察细胞内部超微结构，丙二醛（MDA）试剂盒检测髓核细胞脂质氧化水平。运用免疫荧光染色和Western Blot检测髓核细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白表达水平；运用TargetScan 8.0预测与GPX4靶向结合的miRNA及其位点，并检测该miRNA在髓核细胞中的表达水平。结果 压力作用导致髓核细胞增殖活力下降，脂质氧化水平升高，线粒体萎缩且膜密度增高，而Fer-1可有效逆转压力对髓核细胞的上述作用。压力下调髓核细胞中GPX4蛋白表达，生物信息学预测结果显示miR-1224靶向结合于GPX4且RT-PCR结果显示压力上调髓核细胞中miR-1224的表达水平（P＜0.05）。抑制髓核细胞中的miR-1224可显著升高GPX4蛋白表达，并有效逆转压力诱导的髓核细胞表型退变及脂质氧化水平升高，过表达miR-1224则起到相反作用。结论 压力导致髓核细胞中的miR-1224表达水平升高，通过靶向结合抑制了GPX4蛋白的表达，从而促进髓核细胞铁死亡的发生并导致椎间盘退变。]]> 2022/12/7 14:24:08 28true 目的 研究体内埋置光纤介导的光生物调节对脊髓损伤小鼠组织修复和运动功能恢复的影响。方法 构建小鼠T9节段钳夹损伤及光生物调节治疗模型，将小鼠随机分为假手术（Sham）组、脊髓损伤（SCI）组、光生物调节治疗（SCI+PBM）组。用实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测损伤区炎症因子的表达情况。免疫荧光染色及原位末端标记（TUNEL）法观察损伤区神经元存活和轴突再生情况。采用巴索小鼠量表（Basso mouse scale，BMS）及足印记评估脊髓损伤小鼠后肢运动功能恢复情况。结果 与SCI组比较，SCI+PBM组小鼠损伤区的白细胞介素-1α（interleukin-1α，IL-1α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表达水平显著降低（P＜0.01），总凋亡和神经元凋亡百分比显著降低（P＜0.001），轴突到损伤中心的距离显著缩小（P＜0.001），BMS评分和足印记步长明显优于SCI组（P＜0.01）。结论 体内埋置光纤介导的光生物调节可抑制小鼠脊髓损伤区继发性炎症反应，促进损伤区神经元存活及轴突再生，并最终促使损伤小鼠后肢运动功能的恢复。]]> 2022/10/9 9:33:26 27true 目的 探究酸浆苦味A（Physalin A，PA）对骨关节炎的保护作用及作用机制。方法 取5日龄的C57BL/6乳鼠膝关节原代软骨细胞进行传代培养，使用5 ng/mL的白细胞介素-1β（IL-1β）刺激原代软骨细胞以模拟骨关节炎的软骨细胞炎性模型，并使用不同浓度的PA（2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L）进行干预，具体分组为对照组、IL-1β组、IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组。Western blot法检测不同组间蛋白聚糖（ACAN）、二型胶原（COL2A1）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS5）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧合酶2（COX-2）、白细胞介素6（IL-6）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果 与对照组比较，IL-1β组ACAN、COL2A1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05），而MMP13、ADAMTS5和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）；相比于IL-1β组，IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中ACAN、COL2A1蛋白表达水平逐渐升高（P＜0.05），MMP13、ADAMTS5蛋白和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平逐渐下降（P＜0.05）。此外，相比于对照组，IL-1β组Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）；相比于IL-1β组，IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中，Bcl-2/Bax比值升高（P＜0.05）。结论 PA能通过抗炎和抗凋亡途径发挥保护关节软骨的作用。]]> 2022/10/9 9:33:26 26true 目的 研究淫羊藿苷对激素性股骨头坏死的保护作用及机制。方法 分离SD大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）并按以下方式干预：对照组、地塞米松组（1×10^-6 mol/L），联合干预组［地塞米松（1×10^-6 mol/L）+不同浓度淫羊藿苷（1×10^-8 mol/L，1×10^-7 mol/L，1×10^-6 mol/L，1×10^-5 mol/L）］；检测各组细胞增殖、凋亡、成骨/成脂分化情况，以及转录共激活因子（transcriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）、Runt相关转录因子2（Runt-related transcriptional factor 2，Runx2）蛋白表达变化；siRNA沉默TAZ后，观察各组下游CTGF、Runx2表达变化。体内实验使用52只SD大鼠，随机分为对照组、甲强龙组（甲基强的松龙40 mg·kg^-1·d^-1）和联合干预组（甲基强的松龙40 mg·kg^-1·d^-1+淫羊藿苷100 mg·kg^-1·d^-1）。HE染色评估股骨头骨小梁结构；免疫组化染色评估抗骨钙蛋白（osteocalcin，OCN）、TAZ、血小板-内皮细胞粘附分子（Platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM-1/CD31）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达；TUNEL染色评估细胞凋亡情况；Micro-CT评估股骨头骨密度、骨体积/总体积、骨小梁数、骨小梁间距和骨小梁厚度；血管造影评估股骨头血供情况。结果 体外实验表明地塞米松能促进rBMSCs凋亡和成脂分化，抑制其增殖和成骨分化；而淫羊藿苷能显著削弱这些效应。此外，淫羊藿苷能显著逆转地塞米松对rBMSCs中TAZ、CTGF蛋白表达的影响。抑制TAZ表达后，联合干预组rBMSCs中Runx2的表达也受到抑制。体内实验结果证实淫羊藿苷可保护大鼠股骨头软骨下骨质和股骨头内血液供应免受激素的破坏。激素能显著抑制大鼠股骨头TAZ表达，而淫羊藿苷能促进TAZ表达。结论 淫羊藿苷可通过激活TAZ表达来预防大鼠激素性股骨头坏死的发生发展。]]> 2022/6/7 8:59:56 25true 目的 研究淫羊藿苷对破骨细胞分化和鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基α13（Gα13）介导的信号通路的影响，探讨淫羊藿苷治疗骨质疏松的可能机制。方法 从C57/BL6小鼠四肢骨骨髓中提取原代单核巨噬细胞（bone marrow derived macrophages，BMMs），使用核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony-stlimulating factor，M-CSF）将BMMs诱导成破骨细胞。同时使用不同浓度（0、1、10 μmol/L）的淫羊藿苷进行干预，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和鬼笔环肽染色、qPCR和Western blot等实验分析淫羊藿苷对破骨细胞形成及其对Gα13基因和Akt-GSK3β-NFATc1信号通路相关基因表达的影响。结果 TRAP染色和鬼笔环肽染色结果显示淫羊藿苷可显著抑制破骨细胞形成（P＜0.05）。淫羊藿苷显著促进Gα13基因及蛋白表达（P＜0.05），显著抑制Akt-GSK3β-NFATc1信号通路相关基因及蛋白的表达（P＜0.05）。结论 淫羊藿苷可能是通过促进负调控因子Gα13的表达，从而抑制其下游Akt-GSK3β-NFATc1信号通路来抑制破骨细胞形成。]]> 2022/4/11 11:25:27 24true 目的 探讨miR-27b对骨肉瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 将体外培养的MG63细胞分为模拟物对照组、miR-27b模拟物组、抑制剂对照组和miR-27b抑制剂组，采用RT-PCR检测各组细胞中miR-27b的表达，MTT法检测细胞增殖活性，Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移，流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验检测miR-27b和FOXO1的靶向关系，Western blot检测FOXO1蛋白表达。结果 过表达miR-27b后，骨肉瘤MG63细胞增殖活性升高，侵袭和迁移数增加，而细胞凋亡率降低（P＜0.05）。抑制miR-27b表达与过表达miR-27b的作用相反。miR-27b靶向调控FOXO1，过表达miR-27b后FOXO1蛋白的表达水平降低，而抑制miR-27b表达后FOXO1蛋白的表达水平升高（P＜0.05）。结论 miR-27b可能通过靶向调控FOXO1促进骨肉瘤MG63细胞的增殖、侵袭和迁移，并抑制细胞凋亡。]]> 2022/1/25 11:08:15 23true 目的 探究胃饥饿素（Ghrelin）调控核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法 前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α（tumor necrotic factor-α，TNF-α）炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组，通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase-1）、白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）、白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、消皮素D（gasdermin D，GSDMD）的表达，q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA表达水平，Western Blot检测磷酸化P65（p-P65）和NLRP3的表达。结果 绘制CCK-8结果曲线，确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL，TNF-α干预浓度为20 ng/mL，干预时间都为48 h；与对照组相比，TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白表达显著增高（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著增高（P＜0.05），Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白显著降低（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著降低（P＜0.05）。结论 Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡，改善其迁移能力，这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。]]> 2023/12/12 9:33:09 22true 目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）通过PTEN诱导假定激酶1（PINK1）/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬对骨髓干细胞的趋化及成骨分化的影响。方法 将人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）分为7组：control组、siRNA-NC组、siRNA-HMGB1组、pcDNA-NC组、pcDNA-HMGB1组、pcDNA-HMGB1+siRNA-NC组、pcDNA-HMGB1+siRNA-PINK1组。采用Transwell检测细胞迁移能力；茜素红染色检测各组细胞中钙结节数目；ELISA检测骨桥蛋白（OPN）、碱性磷酸酶（ALP）的含量；RT-qPCR检测各组细胞中成骨细胞特异性转录因子（Osterix）、HMGB1及Runt相关转录因子2（RUNX2）、转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）水平；透射电镜检测线粒体自噬小体数目；Western Blot检测hBMSCs中Parkin及微管相关蛋白1A/1B-轻链3（LC3Ⅱ/Ⅰ）、选择性自噬接头蛋白62（P62）和自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）等线粒体自噬相关蛋白的表达。结果 HMGB1通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬对hBMSCs的趋化作用研究表明：与pcDNA-NC组相比，pcDNA-HMGB1组HMGB1表达、细胞迁移率、线粒体自噬数目及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达增加，Parkin、P62等蛋白的表达降低（P＜0.05）；与siRNA-NC组相比，siRNA-HMGB1组HMGB1表达、细胞迁移率、线粒体自噬数目及Beclin-1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ等表达降低，Parkin、P62表达增高（P＜0.01）。HMGB1通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬对hBMSCs的成骨分化作用研究结果显示：与pcDNA-NC组相比，pcDNA-HMGB1组钙结节数量、Osterix及RUNX2含量、ALP及OPN的表达升高（P＜0.01），PPARγ、C/EBPα的表达降低（P＜0.05）；与pcDNA-HMGB1+siRNA-NC组相比，pcDNA HMGB1+siRNA-PINK1组钙结节数量、Osterix及RUNX2含量、ALP及OPN的表达降低（P＜0.05），PPARγ、C/EBPα的表达升高（P＜0.05）。结论 HMGB1高表达能通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬促进hBMSCs的趋化、成骨细胞分化及抑制成脂细胞分化，可能是骨质疏松症的潜在治疗靶点。]]> 2023/10/8 10:41:55 21true 目的 通过制备破骨前体细胞膜纳米颗粒（nanoparticles，NPs）负载丹酚酸B（salvianolic acid，SalB），构建载药纳米颗粒SalB-NPs，观察其对破骨细胞及成骨细胞分化的影响。方法 采用超声裂解、挤膜的方法制备NPs，并将NPs与SalB共孵育后，使用200 nm聚碳酸酯膜挤出，获得SalB-NPs。在诱导小鼠原代破骨细胞分化和成骨前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化的过程中，按照处理方式不同，分为对照组、SalB组、SalB-NPs组。采用透射电镜、纳米粒度及ZETA电位仪和Western Blot对材料进行表征，采用噻唑蓝检测试剂盒检测材料对RAW 264.7和MC3T3-E1细胞活力的影响，采用高效液相色谱法检测SalB的释放率和装载率。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评价破骨细胞分化能力，通过碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色评估成骨分化能力，采用Real time-PCR检测破骨细胞分化及成骨分化相关基因表达水平。结果 制备的纳米颗粒直径在200 nm左右，同时表达RANK蛋白。TRAP染色显示SalB-NPs显著抑制破骨细胞的形成，下调破骨分化相关基因水平，与对照组和SalB组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。使用成骨诱导培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化，14 d ALP染色和21 d茜素红染色均显示SalB-NPs组ALP活性和钙盐沉积量较SalB组明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 SalB-NPs体外发挥促进成骨分化、抑制破骨细胞形成双重功效，作为骨质疏松的治疗药物开发，有很好的应用前景，未来仍需在骨质疏松模型动物进一步验证其治疗效果。]]> 2023/10/8 10:41:55 20true 目的 探究脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA）中p53积累的分子机制。方法 构建运动神经元生存基因（Survival motor neuron，Smn）敲低的稳转小鼠运动神经元细胞系NSC34，采用蛋白质印迹和荧光定量PCR检测蛋白和基因的变化；用蛋白合成抑制剂放线菌酮（Cycloheximide，CHX）抑制蛋白合成，蛋白质印迹检测p53蛋白降解情况，采用免疫共沉淀检测p53与MDM2结合情况；采用免疫荧光检测小鼠脊髓组织运动神经元数量，运用流式细胞仪分析细胞周期的分布。结果 在Smn敲低的NSC34细胞中，p53蛋白水平显著增加，但是其基因水平未发生明显变化；当蛋白合成被抑制后，SMN缺失会抑制p53蛋白降解，p53积累后会调控下游MDM2表达显著增加，但是其与p53结合却显著减少；p-p53（Ser18）和acetyl-p53（K382）水平显著升高，K382乙酰化位点会影响p53泛素化结合，导致其泛素化被抑制；最终p53积累导致NSC34细胞和SMA小鼠脊髓组织中细胞周期阻滞和凋亡增加。结论 SMN蛋白缺失通过抑制p53泛素化降解途径导致其积累，进而引起细胞周期阻滞和凋亡。]]> 2023/6/16 8:50:27 19true 目的 明确光生物调节（photobiomodulation，PBM）对脊髓损伤后小鼠抑制性瘢痕成分神经黏蛋白表达的影响，及其对神经再生和功能修复的改善作用，阐明PBM下调神经黏蛋白表达的机制。方法 利用皮下埋置360°近红外激光照射光纤，定期连接激光发生装置照射脊髓损伤小鼠，建立脊髓损伤激光治疗模型。将C57BL/6小鼠按照不同处理方式分为三组：Sham组（假手术）、SCI组（脊髓损伤）和SCI+PBM组。采用荧光共染的方法观察不同处理组冰冻切片组织中神经黏蛋白的表达和轴突再生的关系，并明确脊髓损伤后星形胶质细胞是表达神经黏蛋白的责任细胞。采用Western blot和免疫荧光染色检测脊髓组织和原代星形胶质细胞中神经黏蛋白的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）、免疫荧光和Western blot的方法检测PBM治疗后星形胶质细胞245 KD神经黏蛋白分子和130 KD神经黏蛋白分子的表达水平。利用葫芦素Ⅰ抑制原代星形胶质细胞中的Janus激酶2-信号转导和转录活化因子3（Janus Kinase 2-Signal Transducer and Activator of Transcription 3，JAK2-STAT3）通路，反向验证PBM干预神经黏蛋白表达的通路。采用Basso Mouse Scale（BMS）评分和足印记实验观察研究中小鼠的运动功能恢复情况。结果 皮下埋置360°近红外激光光纤后，经过7天光照射治疗改善了脊髓损伤小鼠运动功能（P＜0.05），足印记实验证实PBM显著提高了脊髓损伤小鼠的步长（P＜0.001）；在损伤旁区的脊髓组织中，神经黏蛋白的表达被上调（P＜0.001），且与星形胶质细胞标志物共标；PBM降低了损伤后7天和14天245 KD神经黏蛋白（P＜0.05，P＜0.001）和130 KD神经黏蛋白（P＜0.01，P＜0.01）的表达，伴随轴突再生的增加。分子细胞学实验表明，PBM干预显著降低了脊髓损伤后神经黏蛋白的表达水平（245 KD：P＜0.001；130 KD：P＜0.001），葫芦素Ⅰ的使用抑制了JAK2和STAT3分子的磷酸化水平（P＜0.01，P＜0.0001），同时显著降低了星形胶质细胞神经黏蛋白的表达（245 KD：P＜0.001；130 KD：P＜0.001）。结论 PBM可能通过调节JAK2/STAT3分子轴抑制组织中星形胶质细胞神经黏蛋白的表达，促进小鼠脊髓损伤后轴突再生和运动功能的恢复。]]> 2023/4/12 14:51:07 18true 目的 研究适度的机械应力和跑步运动通过调控RhoA/ROCK/NF-κB通路治疗骨关节炎的机制与效果。方法 在细胞实验方面，通过将不同强度机械应力施加于软骨细胞以研究机械应力对软骨细胞功能和代谢状态的影响。然后用过表达腺病毒或siRNA干预软骨细胞调控ROCK1的表达，从而研究ROCK1基因对软骨细胞代谢和功能的影响。在动物实验中，首先通过将SD大鼠内侧半月板胫骨韧带切断建立内侧半月板不稳定（DMM）模型。通过给予DMM大鼠适度的跑步锻炼方案（15米/分，30分钟/天，5天/周，4周）研究跑步锻炼对骨关节炎进展的影响。结果 研究发现过度的机械应力会导致RhoA/ROCK通路的激活。ROCK1在软骨细胞中的过度表达会影响合成代谢和分解代谢平衡以及激活NF-κB通路，从而加重软骨细胞炎症反应。通过siRNA敲减干预和给予适度应力能下调ROCK1表达从而保护软骨细胞和减轻炎症。适度的跑步运动能降低关节软骨中ROCK1的表达从而减轻软骨损伤和软骨下骨重塑。结论 适度的机械应力和跑步运动能通过抑制RhoA/ROCK/NF-κB通路改善骨关节炎进展。]]> 2023/2/21 14:22:46 17true 目的 构建瘦素受体（Leptin receptor，LepR）报告基因（LepR-CreER）小鼠，在体内研究LepR 3′ UTR中引入polyA对骨关节和其他脏器中LepR基因表达模式的影响。方法 通过CRISPR-Cas9基因编辑技术在LepR基因终止密码子前定点敲入2A-CreERT2-WPER-polyA表达框，构建诱导型LepR-CreER基因小鼠，与R26tdTomato小鼠杂交繁育，获得LepR-CreER;R26tdTomato基因小鼠，提取小鼠组织DNA，采用PCR进行基因型鉴定。对幼龄及成年期LepR-CreER;R26tdTomato基因小鼠的骨关节和脏器组织进行冰冻切片，利用DAPI和免疫荧光染色检测体内LepR+细胞表达情况，并与LepR-Cre;R26tdTomato小鼠LepR+细胞表达进行比较。在LepR-Cre和LepR-CreER小鼠关节腔注射Leptin重组蛋白，采用Safranin O染色和Aggrecan免疫荧光染色观察关节软骨的变化。结果 幼龄期，LepR-CreER;R26tdTomato和LepR-Cre;R26tdTomato小鼠的生长板肥大区及骨髓中均有LepR+细胞存在，关节软骨中没有LepR+细胞的出现；而成年期，LepR-CreER;R26tdTomato小鼠关节软骨中LepR+细胞的数目较LepR-Cre;R26tdTomato小鼠明显增多，阳性细胞分布范围扩大。关节腔注射Leptin后，LepR-CreER小鼠较LepR-Cre小鼠出现更严重的关节软骨退变表现。进一步生物信息学及表达对比分析发现LepR基因的3′UTR存在关节软骨中高表达的miR-31-5p互补结合位点。结论 成年期，不同方式构建的LepR报告基因小鼠中LepR+细胞表达具有差异，激活异位表达LepR+细胞的关节软骨出现更严重的骨关节炎，生信分析提示其中的差异可能源自LepR基因3′UTR存在miR-31-5p的潜在结合区域。]]> 2023/2/21 14:22:46 16true 目的 明确LepR⁺骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）在失重性骨丢失发生中的作用并探究四甲基吡嗪（tetramethylpyrazine，TMP）对失重性骨丢失的治疗效果。方法 本研究构建特异性示踪LepR⁺ BMSCs的小鼠（LepR-Cre; R26^tdTomato），取P7小鼠鼠尾进行基因鉴定，将3月龄LepR-Cre; R26^tdTomato雄鼠分为四组：对照组、后肢去负荷（hindlimb unloading，HU）组、HU腹腔注射玉米油组、HU腹腔注射TMP药物组。显微CT分析对照组、HU组小鼠股骨骨小梁，以评估失重对骨量的影响；取两组股骨组织进行冰冻切片，行免疫荧光染色检测成骨细胞分子标志物Osterix（Osx）表达情况，统计骨软骨交界及骨小梁处LepR⁺ BMSCs来源细胞中成骨细胞占比，分析失重对LepR⁺ BMSCs成骨分化的影响。另外，取HU腹腔注射玉米油组、HU腹腔注射TMP药物组小鼠股骨组织行冰冻切片，通过HE染色检测TMP药物对骨量影响；在Osx染色后统计骨软骨交界及骨小梁处LepR⁺ BMSCs来源细胞中成骨细胞占比，对比分析TMP对LepR⁺ BMSCs成骨分化的影响。结果 HU小鼠出现骨质疏松表型并且LepR⁺ BMSCs来源的成骨细胞数目显著减少，给予HU小鼠TMP药物处理可以增加骨量，同时增加LepR⁺ BMSCs来源的成骨细胞数目。结论 LepR⁺ BMSCs参与失重性骨丢失的发生，TMP通过促进LepR⁺ BMSCs向成骨分化有助于治疗失重性骨丢失。]]> 2024/11/29 9:29:33 15true 目的 评价富含虫草素的冬虫夏草乙醇提取物（CRECM）对骨肉瘤的抑制作用。方法 制备CRECM，并采用高效液相色谱（HPLC）评估CRECM中虫草素的含量。体外实验，以不同浓度（1、2、4 μg/mL）的CRECM诱导LM8细胞，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit，CCK）-8检测细胞活力；采用流式细胞术分析细胞凋亡情况；通过划痕实验测定细胞迁移能力；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot法测定基质金属蛋白酶（MMP）-2的表达。体内实验采用昆明小鼠建立骨肉瘤LM8的肿瘤模型，观察不同浓度（1、2、4 mg/kg）CRECM刺激的小鼠在不同时间点的肿瘤体积、体重变化和总体生存情况。结果 CRECM的虫草素含量为33 350.676 μg/mL。不同浓度的CRECM均可显著降低LM8细胞活力，且呈剂量依赖性；CRECM引起LM8细胞的凋亡率显著增加，并且通过划痕实验确定CRECM显著降低了细胞迁移能力；经CRECM诱导后，MMP-2 mRNA水平显著降低。在小鼠模型中，CRECM在体内抑制骨肉瘤细胞生长，且未出现明显的药物毒性。结论 CRECM剂量依赖性地抑制骨肉瘤的增殖，其抗癌作用通过诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移来实现；CRECM在体内抑制肿瘤生长，且无明显的药物毒性。]]> 2024/11/29 9:29:33 14true 目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5（LncRNA GAS5）与微小RNA-21（miR-21）的关系，阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧（OGD/R）处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12）模型；沉默和过表达GAS5，构建下调shGAS5表达的慢病毒，通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白（phosphatase and tensin homolog，PTEN）基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase 3）、B淋巴细胞瘤（Bcl）-2相关X基因（Bax）、Bcl-2和蛋白激酶B（AKT）的RNA表达水平；Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT（p-AKT）的蛋白表达水平；TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及p-AKT表达水平降低（P＜0.05），GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高（P＜0.05）。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果，且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21，进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡（P＜0.05）。结论 GAS5通过结合miR-21，上调PTEN并抑制AKT磷酸化，进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。]]> 2024/4/2 14:57:21 13true 目的 探讨miR-146a/转化生长因子-β（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/母亲抗肢瘫（small mother against decapentaplegic，SMAD）通路在脊柱结核进展中的调控机制。方法 收集脊柱结核病人和正常病人髓核组织，验证miR-146a/TGF-β1/SMAD通路在结核髓核组织中的表达量；分离培养髓核细胞，敲低/过表达miR-146a，分别应用qPCR、Western blot、CCK-8、划痕实验验证miR-146a对TGF-β1/SMAD通路表达及髓核细胞增殖、迁移能力的影响。结果 与正常病人比较，脊柱结核病人髓核细胞增殖及迁移能力显著减低，miR-146a在脊柱结核病人髓核组织中表达量显著减低，而脊柱结核病人髓核组织中SMAD同系物2（SMAD2）、SMAD同系物3（SMAD3）、SMAD同系物4（SMAD4）、TGF-β1基因表达增高，SMAD同系物7（SMAD7）表达减低，提示miR-146a与TGF-β1/SMAD通路活性显著负相关。过表达miR-146a可抑制SMAD2、SMAD3、SMAD4、TGF-β1和促进SMAD7表达，而敲低miR-146a可促进SMAD2、SMAD3、SMAD4、TGF-β1 mRNA和抑制SMAD7表达水平。细胞实验进一步证实过表达miR-146a可促进脊柱结核病人髓核细胞增殖和迁移能力，而敲低miR-146a可显著抑制其增殖和迁移能力。结论 miR-146a是脊柱结核进展的关键调控因子，其可通过抑制TGF-β1/SMAD通路活性进而调控髓核细胞增殖及迁移活性。]]> 2024/1/30 11:00:24 12true 目的 探讨适度运动训练通过调节蛋白酪氨酸磷酸酶-2（SH2 domain-containing tyrosine phosphatase 2，SHP2）介导的线粒体功能损伤对骨关节炎（osteoarthritis，OA）进展的影响及其作用机制。方法 在细胞实验中，采用白细胞介素-1β（interleukin-1 beta，IL-1β）处理构建炎症软骨细胞模型，检测SHP2表达变化；分别通过过表达及siRNA质粒调控软骨细胞中SHP2的表达，以明确SHP2在OA进程中的作用；进一步利用细胞荧光染色分析SHP2参与OA病理过程的机制。在动物实验中，选取雄性SD大鼠，通过内侧半月板不稳定（destabilization of medial meniscus，DMM）手术建立OA模型，随后进行为期6周的适度运动训练（速度15 m/min，每日30 min，每周5天），评估适度运动对OA进展的改善作用。结果 炎性软骨细胞中磷酸化SHP2（phosphorylated SHP2，P-SHP2）蛋白水平显著升高，过表达SHP2导致软骨细胞合成代谢与分解代谢的失衡。而通过siRNA敲低SHP2能够缓解软骨细胞的炎症反应与软骨细胞线粒体损伤。适度运动训练能降低关节软骨中SHP2的表达进而改善大鼠关节软骨损伤。结论 适度运动训练通过抑制SHP2诱导的线粒体损伤改善OA进展。]]> 2026/1/30 15:05:05 11true 目的 本研究旨在鉴定与骨形态发生蛋白9（BMP9）有协同促成骨作用的新因子，以期为骨质疏松症的治疗提供新的分子靶点和实验依据。方法 为系统性评价钙释放激活钙调节蛋白2（ORAI2）在成骨分化中的功能，本研究构建了ORAI2过表达及沉默的细胞模型，在机制研究中，我们通过RNA测序（RNA-seq），利用实时定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blotting）验证关键分子的表达变化；借助碱性磷酸酶（ALP）染色及活性分析评估细胞成骨状态。结果 研究发现，ORAI2在BMP9诱导的鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）成骨分化过程中的表达显著上调，而在骨质疏松（卵巢切除）大鼠模型中的表达下调。体外过表达ORAI2能有效促进成骨分化，相反，沉默ORAI2则显著抑制成骨分化。RNA-seq及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析显示，PI3K/Akt是介导ORAI2功能的关键信号通路。此外，通过蛋白质谱分析鉴定出含IQ基序GTP酶激活蛋白1（IQGAP1）是ORAI2的结合蛋白，ORAI2通过与IQGAP1结合特异性地激活了MAPK/ERK1/2信号通路。结论 ORAI2通过与BMP9协同，经PI3K/Akt和MAPK/ERK1/2通路促进成骨分化，是骨质疏松症的潜在治疗靶点。]]> 2025/7/25 14:53:42 10true 目的 探讨生物型股骨长柄治疗股骨转子间内外侧壁骨折的生物力学稳定性。方法 取Sawbones人工股骨标准骨模型制备三组模型，分为正常组、骨折组（股骨转子间内外侧壁骨折）和重建组（经钢丝捆扎内外侧壁骨折），每组6根，并分别植入生物型股骨长柄，对三组模型进行轴向压缩实验（最大1 400 N，速度30 N/s）和扭转实验（角度为0~1°，速率0.5°/s），计算不同载荷下的股骨近端轴向下沉位移、轴向压缩最大刚度和扭转刚度情况。结果 随着载荷增加，三组模型轴向下沉位移亦随之增加。1 400 N时，骨折组轴向下沉位移为（0.64±0.46） mm，重建组为（0.47±0.40） mm，与正常组[（0.43±0.35） mm]比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。三种模型在1 400 N载荷下股骨近端轴向下沉位移均不超过1 mm。骨折组轴向压缩最大刚度为（2 188.52±152.24） N/m，重建组为（3 085.54±255.82） N/m，骨折组与正常组[（3 265.39±258.43） N/m]比较，差异有统计学意义（t=8.791，P＜0.001）；重建组与正常组比较，差异无统计学意义（t=1.215，P=0.253）。骨折组扭转1°的扭转刚度为（18.17±0.78） Nm/deg，重建组为（18.85±0.48） Nm/deg，两组与正常组[（19.05±0.63） Nm/deg]比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 股骨近端转子间骨折因解剖完整性破坏，使用生物型股骨长柄固定初始稳定性良好，辅助钢丝捆扎重建骨折端，可提高假体稳定性。股骨转子间内外侧壁骨折使用生物型股骨长柄是一种安全、有效的选择。]]> 2025/6/5 14:40:06 9true 目的 研究特定的低强度脉冲超声（low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS）通过调控鞘磷脂激酶1（sphingosine kinase 1，SPHK1）/核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）通路治疗骨关节炎（osteoarthritis，OA）的机制与效果。方法 利用GEO和GeneCards数据库等生物信息学技术，筛选OA进展中的关键基因。在细胞实验中，使用白细胞介素-1β（interleukin-1 beta，IL-1β）构建炎症-退行性软骨细胞模型，检测SPHK1的表达水平。采用过表达腺病毒和siRNA干预调控SPHK1的表达，探讨SPHK1对软骨细胞代谢与功能的影响。此外，施加特定强度的LIPUS干预软骨细胞，研究其对软骨细胞功能与代谢平衡的调节作用。在动物实验中，建立SD大鼠内侧半月板不稳定（medial meniscal destabilization，DMM）模型，通过给予30 mW/cm²、20 min/天、5天/周、6周的LIPUS干预，观察LIPUS对OA进展的影响。结果 生物信息学分析确定SPHK1是OA进展中的关键基因之一。在炎症刺激下，SPHK1在软骨细胞中的表达显著上调，过表达SPHK1可破坏软骨细胞合成代谢与分解代谢的平衡，并激活NF-κB通路，增强软骨细胞的炎症反应和退变。通过siRNA敲低SPHK1和LIPUS干预，SPHK1的表达显著下调，NF-κB通路被抑制，软骨细胞功能得到保护，炎症反应减轻。LIPUS干预显著降低DMM大鼠关节软骨中SPHK1的表达，缓解软骨损伤并改善OA病理进展。结论 特定强度的LIPUS干预能通过抑制SPHK1/NF-κB通路改善OA进展。]]> 2025/4/3 14:07:07 8true 目的 探究过表达肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3（TNFAIP3）是否会抑制核因子-κB（NF-κB）通路影响巨噬细胞极化状态，从而调控强直性脊柱炎（AS）的炎症反应，并初步阐明相关的分子机制。方法 采用1,3-β-D葡聚糖注射BALB/c小鼠构建AS模型，为模型组。AS小鼠注射空载体为AS+oe-NC组，注射TNFAIP3质粒为AS+oe-TNFAIP3组。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白印迹法（Western blot）分别检测三组小鼠脊柱组织中TNFAIP3的mRNA和蛋白表达水平，验证过表达效率；苏木精-伊红（HE）染色评估脊柱组织的病理变化。免疫组化检测脊柱周围组织中炎症因子［白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］的表达水平。通过荧光染色标记CD11b-FITC/CD86（M1型巨噬细胞）和CD11b-FITC/CD206（M2型巨噬细胞），评估巨噬细胞极化状态。Western blot检测NF-κB通路关键蛋白IκB激酶α（I-kappa-B kinase alpha/β，IKKα/β）、核因子κB亚基p65（Nuclear factor kappa-B subunit p65，p65）、磷酸化核因子κB亚基p65（Phosphorylated nuclear factor kappa-B subunit p65，p-p65）的表达水平。体外实验中，采用LPS和IL-4分别诱导RAW264.7巨噬细胞向M1型和M2型极化，分析TNFAIP3过表达对巨噬细胞极化的影响。结果 过表达TNFAIP3显著提高了TNFAIP3的mRNA和蛋白表达水平（P＜0.01），缓解了脊柱组织的病变。与模型组和AS+oe-NC组比较，AS+oe-TN-AIP3组脊柱周围组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量显著降低（P＜0.001）。巨噬细胞极化分析显示，AS+oe-TNFAIP3组M1型巨噬细胞（CD11b+CD86+）比例显著减少（P＜0.001），而M2型巨噬细胞（CD11b+CD206+）比例显著增加（P＜0.001）。Western blot结果显示，过表达TNFAIP3显著抑制NF-κB通路关键蛋白（IKKα/β、p65、p-p65）的激活（P＜0.01）。体外实验进一步证实，过表达TNFAIP3促进IL-4诱导的M2型极化（P＜0.001），同时抑制LPS诱导的M1型极化（P＜0.001）。结论 过表达TNFAIP3通过抑制NF-κB通路调控巨噬细胞极化，促进M2型极化并抑制M1型极化，从而缓解AS的炎症反应。本研究初步揭示了TNFAIP3在AS中的抗炎作用及其分子机制。]]> 2025/4/3 14:07:07 7true 目的 探究二甲双胍对Bhlhe40表达及破骨细胞分化功能的影响。方法 C57BL/6小鼠（雄性，4周龄）股骨中提取原代骨髓单核细胞，RNA测序分析预测二甲双胍影响破骨细胞分化的相关基因，并通过实时荧光定量PCR验证。诱导原代骨髓单核细胞向破骨细胞分化（OC组），诱导分化的同时加入低浓度二甲双胍药物干预（OC+MET组），免疫荧光激光共聚焦检测对比两组间Bhlhe40表达差异，蛋白免疫印迹试验（Western blot）检测两组间Bhlhe40蛋白表达差异。抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）分析Bhlhe40基因敲除小鼠（Bhlhe40^−/−组）与野生型小鼠（WT组）原代骨髓单核细胞经诱导后形成的破骨细胞的面积，Micro-CT对比Bhlhe40^−/−组与WT组小鼠股骨的骨量及相关参数，免疫组化染色对比两组股骨远端的TRAP表达量。结果 经RNA测序预测及实时荧光定量PCR验证，诱导原代骨髓单核细胞向破骨细胞分化后Bhlhe40高表达，经二甲双胍干预后，Bhlhe40表达降低。免疫荧光激光共聚焦检测结果可见OC组破骨细胞中Bhlhe40高表达，而OC+MET组中Bhlhe40表达量降低；Western blot结果显示OC+MET组中Bhlhe40蛋白表达明显较OC组下调。TRAP染色结果显示Bhlhe40^−/−组破骨细胞面积较WT组减少；Micro-CT结果显示Bhlhe40^−/−组小鼠股骨骨小梁增厚，密度升高，骨量增加；免疫组化染色结果显示Bhlhe40^−/−组小鼠股骨TRAP阳性细胞数目减少。结论 Bhlhe40调控破骨细胞形成及分化，促进其骨吸收功能，二甲双胍可通过下调Bhlhe40表达抑制破骨细胞分化及其骨吸收能力。]]> 2025/2/7 13:12:33 6true 目的 挖掘miR-365a-5p在促进膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）进展中的靶向基因，并研究其作用机制。方法 纳入2020年3月至2022年3月我院收治的10例KOA病人和10例健康人群，并通过qRT-PCR方法检测KOA病人和正常人软骨细胞C-28/I2中miR-365a-5p的差异表达。通过CTD和GeneCards数据库获取KOA相关的基因，并运用miRDB数据库预测miR-365a-5p的靶基因。使用Cytoscape软件的ClueGO插件进行miR-365a-5p靶向的KOA相关的基因功能富集分析。蛋白质-蛋白质相互作用构建挖掘关键基因。最后通过细胞实验进行验证。结果 miR-365a-5p在KOA病人的血清中高表达。通过公共数据库分析预测了FOXO1是miR-365a-5p的关键靶基因并与KOA相关。细胞的功能缺失实验证实miR-365a-5p的抑制能够促进KOA条件下软骨细胞的增殖并抑制凋亡。双荧光素酶报告验证了miR-365a-5p和FOXO1的靶向关系。结论 miR-365a-5p通过靶向FOXO1促进了KOA的进展。miR-365a-5p或许能成为KOA治疗的潜在靶点。]]> 2025/2/7 13:12:33 5true 目的 探讨脉冲电磁场（PEMF）通过抑制软骨细胞铁死亡与炎症反应延缓骨关节炎（OA）进展的作用及其机制。方法 采用白细胞介素-1β（IL-1β，10 ng/mL）刺激大鼠软骨细胞建立体外炎症模型，并使用内侧半月板失稳（DMM）手术建立大鼠OA体内模型。体外实验分为对照组、IL-1β诱导组、PEMF处理组（75 Hz，1.5 mT，24 h）及IL-1β联合PEMF处理组。采用CCK-8法检测细胞活力，ELISA法检测前列腺素E2（PGE2）、基质金属蛋白酶1（MMP1）和MMP3水平，Griess法检测一氧化氮（NO）含量，试剂盒检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）及铁离子浓度，Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）及核因子κB（NF-κB）通路蛋白表达。通过Nrf2抑制剂ML385及小干扰RNA（siRNA）敲低Nrf2验证信号通路机制。体内实验取材后采用番红O-固绿染色评估软骨组织病理变化。结果 体外实验显示，PEMF显著拮抗IL-1β诱导的软骨细胞活力下降（P＜0.05），降低PGE2、NO、MMP1和MMP3的生成（P＜0.05）。PEMF通过降低MDA及铁离子水平，同时上调GSH、GPX4和铁蛋白表达，有效抑制IL-1β诱导的铁死亡（P＜0.05）。机制研究表明，PEMF显著上调Nrf2及其下游靶点HO-1的表达，并抑制NF-κB通路活化（P＜0.05）。Nrf2抑制剂ML385及Nrf2基因敲低均显著削弱PEMF对炎症和铁死亡的抑制作用（P＜0.05）。体内实验证实，PEMF处理显著改善DMM大鼠关节软骨结构，维持软骨细胞排列整齐。结论 PEMF可通过激活Nrf2信号通路，抑制软骨细胞的炎症反应与铁死亡，进而延缓OA的进展，该策略为OA治疗提供了一种具有临床应用潜力的非侵入性干预手段。]]> 2026/5/25 15:24:14 4true 目的 本研究通过建立大鼠糖尿病足溃疡（diabetic foot ulcer，DFU）和下肢缺血模型，评估高压氧治疗（hyperbaric oxygen therapy，HBOT）大鼠DFU的愈合效果，并验证该疗效是否通过激活缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）信号通路及其下游血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）实现。方法 将雄性SD大鼠18只，按随机数字表法分为3组，分别为空白对照组（正常大鼠）、糖尿病对照组（糖尿病大鼠）、高压氧实验组（糖尿病大鼠+HBOT）。糖尿病对照组和高压氧实验组建立Ⅱ型糖尿病模型后，三组均在麻醉情况下制备右下肢足背溃疡创面，且于大腿根部分离、结扎并离断股动脉，模拟缺血缺氧环境，均于术后观察5天，再将高压氧实验组行为期5天的HBOT。期间观测并记录三组大鼠双下肢温差、溃疡愈合情况，HBOT干预后溃疡处行苏木精-伊红（HE）染色检测病理变化，免疫组织化学方法分析HIF-1α、VEGF、EPO的表达情况，Western blot检测HBOT干预前后HIF-1α、VEGF、EPO蛋白相对水平变化。结果 与空白对照组和糖尿病对照组比较，高压氧实验组双下肢平均温差显著降低，溃疡恢复情况较好、面积明显缩小，且组织病理学显示纤维性修复并伴有多量的新生小血管，HIF-1α、VEGF和EPO的表达水平显著上调，表现出更优的溃疡愈合效果。高压氧实验组内HIF-1α、VEGF、EPO水平较HBOT干预前明显上调。结论 HBOT可改善糖尿病大鼠下肢缺血性足溃疡的愈合情况，其作用机制可能通过提升HIF-1α及其下游因子表达水平实现。]]> 2026/5/25 15:24:14 3true 目的 探讨外源性补充麦角硫因（ergothioneine，EGT）对衰老相关周围神经再生障碍的改善作用及其潜在机制。方法 选用18月龄C57小鼠，采用EGT（20 mg/kg）灌胃预处理4周后建立坐骨神经挤压伤模型，并持续干预至损伤后28天。通过免疫荧光、荧光金逆行示踪技术评估EGT对神经早期轴突再生的影响；利用透射电镜、表皮神经支配染色、马松染色及步态分析，评价EGT对长期神经修复及功能性再支配的效果。同时，应用转录组对EGT干预后的背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）进行测序，探究EGT调控神经再生的分子及细胞学机制。结果 EGT显著促进了衰老小鼠损伤后早期轴突再生；远期评估显示，EGT有效促进了靶器官的功能性再支配，并减轻了神经源性肌肉萎缩。转录组测序结果表明，EGT显著抑制了损伤后DRG组织中的炎症相关信号通路激活。结论 EGT能够通过抑制衰老个体神经损伤后DRG局部炎症反应，优化再生微环境，从而有效促进周围神经再生，抵抗衰老相关的再生障碍，为衰老相关神经再生障碍的干预提供了新思路。]]> 2026/3/27 14:26:11 2true 目的 探讨兔脊髓爆震伤（spinal cord blast-induced injury，SCBII）后早期大体病理学及神经细胞的形态学变化。方法 将36只家兔按照随机数字法分成爆炸距离1 cm、2 cm、3 cm、4 cm、5 cm五组及假手术对照组，每组6只，电控引爆，构建制作SCBII模型，观察动物全身及脊髓损伤情况，分析死亡原因，并观察动物大体的病理、生理及神经细胞的形态学改变。结果 起爆距离1 cm、2 cm、3 cm内，实验家兔均出现即刻死亡，其中心脏及肺脏爆震伤是引起死亡的主要原因。在起爆距离4 cm成功建立SCBII模型，5 cm起爆距离可见局部脊髓无水肿，双下肢运动诱发电位无明显改变。苏木精-伊红染色及透射电镜观察到随着爆炸距离的延长，神经细胞坏死明显减轻。4 cm起爆距离造模成功，损伤后6 h、12 h、24 h、48 h双下肢肌力改良的Tarlov's评分分别为0、（0.81±0.45）分，（1.47±0.58）分和（2.77±0.67）分，随着时间推移有一定程度的肌力恢复，差异具有统计学意义（F=4.335，P=0.017）。损伤后6 h、12 h、24 h、48 h的TUNEL阳性细胞分别为（27.80±2.45）个、（68.61±7.83）个、（142.78±9.44）个和（234.53±8.92）个，损伤后6 h、12 h、24 h、48 h的TUNEL阳性细胞数量比较，差异具有统计学意义（F=105.852，P＜0.001）。结论 兔SCBII与起爆距离呈负相关，需密切关注心肺等空腔脏器的严重损伤，SCBII损伤早期即出现神经细胞的凋亡，并随着时间推移增多。]]> 2026/3/27 14:26:12 1true